植物蛋白质提取及其性质研究论文

蛋白质是保证机体健康最重要的营养素，它是维持和修复机体以及细胞生长所必需的，它不仅影响机体组织如肌肉的生长，还参与激素的产生、免疫功能的维持、其它营养物质和氧的转运以及血红蛋白的生成、血液凝结等多方面。蛋白质的蛋白质食物来源可分为植物性蛋白质和动物性蛋白质两大类。虽然动物蛋白质和植物蛋白质的营养价值都是人体所必需的，但随着现代生活水平的提高，人们日常摄入动物蛋白质含量越来越多，植物蛋白质的摄入量却越来越少。营养学研究发现，食用过多的动物蛋白质有害于肾脏健康。植物蛋白质中，豆类、谷物含有丰富的蛋白质，特别是大豆含蛋白质高达36%~40%，氨基酸组成也比较合理，在体内的利用率较高，是植物蛋白质中非常好的蛋白质来源。麦弗逊植物蛋白粉天然的植物原料，优质可靠。

植物蛋白质的提取方法基本上有这几种：盐析法、有机溶剂法和等电点法。

1、盐析法

原理：盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐，使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出，而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

2、有机溶剂法

原理：机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低，因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力，促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似，有机溶剂与蛋白质争夺水化水，致使蛋白质脱除水化膜，而易于聚集形成沉淀  。

3、等电点法

原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

使用植物蛋白提取试剂 P1258 Plant total protein extraction kit (cat # P1258)50次提取 280元 100次提取480元描述：植物蛋白提取试剂适用于多种植物根，茎，叶及果实等的新鲜或冻存组织。植物组织成分复杂，含有较多酚类物质、多糖、色素、次生代谢物质等，致使植物蛋白质的分离提取变得困难和复杂。本试剂采用优化的试剂和程序，快速有效提取多种植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除植物组织所含的多酚、多糖、醌、色素、脂质、次生代谢物质等干扰蛋白质研究的成分，使提取的蛋白质处于最佳的活性状态和检测状态，适应于酶学活性测定，单向及双向蛋白电泳，Western Blot和免疫共沉淀分析等蛋白质研究实验。组成和规格：无色透明的提取试剂50 ml或100 ml。贮存： 4°C，密封避光1年。 用途： 提取多种植物组织和细胞的可溶性和疏水性蛋白。如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。操作步骤：1. 组织匀浆，必须充分匀浆，此步骤非常关键：(1) 冻存组织匀浆：预先将研钵置于－20°C ~－70°C冰箱内冷冻。取液氮冻存的植物组织，放入冰冻的研钵内研磨至粉末状，注意使组织一直处于冰冻状态，如组织颜色加深或变黑通常表明组织已融化。将研磨好的组织转移到EP 管中，按每200 mg植物组织加500 �8�6l的比例加提取试剂，混匀后冰上放置20分钟，其间可数次颠倒混匀，以便蛋白溶解。(2) 新鲜组织匀浆：取新鲜组织放入研钵中，按每200 mg植物组织加500 �8�6l的比例加提取试剂，充分研磨使匀浆液中看不到大的块状或片状组织，保证组织研磨破碎。转移至离心管内，冰上放置20分钟。2. 离心：12000 g离心15分钟，弃去沉淀。蛋白在上清中。取上清转移至新管。3. 如果进行酶学测定，直接使用。如进行SDS-PAGE和Western Blot，将上清直接与2 x SDS sample/loading buffer (#B1007)混合后上样。或－70°C冻存。蛋白定量建议用BCA方法进蛋白定量（普利莱公司的BCA蛋白定量试剂盒#P1511）。通常上清内植物色素已基本去除，如有少量残留亦不影响蛋白定量及电泳实验。如进行双向电泳或欲彻底清除色素等杂质可进行以下内骤: 1. 取上清液加入5倍体积的甲醇(或者丙酮)混匀，－20°C至少1小时沉淀蛋白质。2. 12000 g离心15分钟沉淀蛋白。3. 弃去上清。自然干燥蛋白沉淀，依据试验将沉淀溶于相应的缓冲液。如进行Western Blot 亦可用提取试剂溶解。常见问题及解决方法：1. 提取的蛋白量少：1) 组织蛋白含量较少，如水果等，可增加组织量；2) 组织匀浆不充分，如纤维较多的组织，破碎较困难，应适当延长匀浆时间；3) 组织过老或水分丢失致使其干燥，故尽量选用新鲜较嫩的组织；4) 甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分，应延长溶解时间或使用较强的蛋白溶解剂。2. 蛋白质量不佳：1)提取的蛋白有多酚或色素等杂质残留，可重复用丙酮或甲醇沉淀；2) 蛋白质降解，操作各步骤均应在冰上进行；加入蛋白酶抑制剂。 用最后的提取物通过计算就可以知道含量了