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学术堂整理了十个关于大肠杆菌的论文题目,供大家参考:1、大肠杆菌表达系统的研究进展2、重组大肠杆菌高密度发酵研究进展3、山东省鸡大肠杆菌的分离鉴定4、大肠杆菌mtID基因和gutD基因的克隆,全序列测定和高效表达5、我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定6、中国不同地区家禽大肠杆菌血清型分布和耐药性比较研究7、大肠杆菌毒力因子研究概况8、致病性大肠杆菌的耐药性监测9、动物大肠杆菌耐药性的变化趋势10、纳米银对大肠杆菌的抗菌作用及其机制
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仔猪水肿病的最新研究进展税光伟、李健、曾情、洪洋、吕瑞青、杜德燕西南大学荣昌校区动物医学系2006级本科3班 402460摘要: 仔猪水肿病最早发现于英国,是由溶血性大肠杆菌引起肠毒血症,而使全身毛细血管或小血管受到破坏,通透性增大,水液外渗过多,造成的以头部、眼睑、耳部等处水肿、共济失调和急性死亡为主要特征的急性传染病,又称猪胃肠水肿或猪大肠杆菌肠毒血症,有高度致死性疾病。近年来,随着畜牧业的发展,仔猪水肿病的发生日益增多,在各地呈上升趋势,已成为猪的常见病和多发病,并成为早期断奶后仔猪死亡的主要原因。给养猪业造成了重大的经济损失。因此,及早确诊本病采取针对性的有效的综合性防治措施、找出一些适用于本病的疫苗,对保证养猪业的发展具有非常重要的现实意义。关键词:仔猪水肿病 综合性防治 疫苗 研究进展 致死性中图分类号 文献标识码 A 文章编号 1424512Piglet edema of the latest research progressShui GuangWei et al(College of Animal Medicine and Technolog, SouthWest University ,RongChang ,ChongQing ,402460)Abstract Piglet edema were first discovered in Britain, is hemolytic E. coli intestinal toxemia, so capillaries or systemic damage to the small blood vessels, increasing permeability and fluid extravasation too much water, to the head, eyelids, Equality ear edema, acute ataxia and death as the main feature of acute infectious diseases, also known as gastrointestinal edema pigs or pig intestinal toxemia E. coli, a highly lethal disease. In recent years, with the development of animal husbandry, the incidence of edema piglets increased in the upward trend around, The pig has become a common diseases and frequently-occurring disease, and become the early weaning piglet mortality. To the pig industry has caused significant economic losses. Therefore, early diagnosis of the disease to take targeted and effective comprehensive prevention and control measures, applied to identify the disease vaccine Pig Industry to ensure that the development is very important practical words Piglet edema;Ntegrated control;Vaccine Progress;Lethal1、简介猪水肿病是由溶血性大肠杆菌引起的断奶仔猪的一种急性、散发性、致死性肠毒血症。也称猪胃肠水肿或猪大肠杆菌肠毒血症。主要以全身水肿和神经病状为特征,表现为四肢运动障碍、行走无力、瘫痪、眼睑、肛门水肿、体温下降,叫声嘶哑。潜伏期很短,病程为2–3天,死亡率很高。发病慢的病猪精神萎靡,厌食,盲目行走或转圈,摇晃,对周围环境十分敏感,触之惊叫,口吐白沫,体温升高,心跳加快。眼睑、脸部、头部、颈部、胸腹、耳部等发生水肿;急性病猪5-6小时即死亡。2、流行特点主要发生于断奶后的仔猪.发病率5—30% .致死率高达90%以上.发病多是营养良好和体格健壮的仔猪:一般局限于个别猪群.不广泛传播:多见于春季的4—5月和秋季的9—10月.病的发生与饲料和饲养方式的改变.饲料单一或喂给大量浓厚的精饲料等有关。3、发病原因3.1 病原因素本病的病原为溶血性大肠杆菌,革兰氏染色显阴性.无芽胞,无荚膜,有鞭毛。值得注意的是引起本病发生的致病性大肠杆菌并不是外来的或“临时参加”的。此类大肠杆菌在哺乳期间即有少量存在于仔猪肠道内,但在哺乳条件下并不致病.在适当诱因(如断奶、饲料突变、天气变化等)的作用下,引起机体抵抗力下降,特别是胃肠功能紊乱.肠内的微生态平衡破坏.促进了溶血性大肠杆菌在仔猪肠道内不断繁殖,产生 毒素。经肠道吸收进入血液后逐渐在仔猪体内积聚.引起毒血症,毒素积聚到一定程度,就引起仔猪发病,导致死亡。3.2 母源性大肠杆菌性抗体因素仔猪出生后,母源抗体的传递是通过小肠吸收以母乳而获得.母源性大肠杆菌性抗体在仔猪体内维持时间是7—35天.所以断奶后易发病3.3 消化功能不健全在仔猪阶段.猪胃肠内缺乏胃蛋白酶和游离盐酸,难以消化蛋白质。特别是植物性蛋白质。如饲料中添加过多的豆粕.由于豆粕含有胰蛋白酶抑制因子和植物凝血素.后者会损伤小肠绒毛.一旦绒毛被损伤便会降低蛋白质的吸收,前者则抑制胰蛋白酶的活性,引起蛋白质分解吸收,一般情况下初喂这些饲料还不至于发病,到中后期,由于蛋白质不能彻底分解,使肠内容物腐败、发酵,刺激肠末梢感受器蠕动增强,从而引起腹泻、消不良。继而发生水肿病,因营养过剩而引起的水肿病多数归于死亡。3.4 断奶对猪的应激随着日龄的增长.仔猪肠胃内的消化酶不断增加,但由于断奶应激,各种消化酶的活性有所下降。从而使消化生理功能失调,导致肠道菌落失调。而早期断奶应激可降低仔猪体内循环抗体的水平。抑制细胞免疫力,从而导致溶血性大肠杆菌过度繁殖产生毒素.被机体吸收后而发生水肿。3.5 饲料因素3.5.1 饲料蛋白质过高目前,有的饲料厂家为追求高蛋白、高产出的精饲料.使得饲料蛋白水平过高,而早期断奶仔猪的消化生理特点决定了对植物性蛋白质的消化能力差.较多饲料蛋白进入肠道后发生腐败.对消化器官组织发生伤害.导致消化不良和腹泻.未消化的蛋向质或未被吸收的氨基酸进入肠道后.导致肠道微生物区系的紊乱而利于本菌繁殖产生毒素,诱发该病。3.5.2 饲料中维生素E、硒的缺乏维生素E和硒在机体内共同参与机体的抗氧化防御体系.保护细胞和细胞膜的结构和功能免受脂质过氧化物游离基的破坏.两者有复杂的补偿和协同作用,机体缺乏时,免疫器官正常结构遭到破坏,抗病力减弱,引起仔猪营养不良,消化酶活性降低,影响消化道正常生理机能,肠道菌群失调.从而为某些致病性大肠杆菌的增殖、附着和毒素产生与吸收创造了条件 。3.6 饲养条件仔猪的生活都有一定的规律性,严防突然改变饲养条件及饲养方式,尤其在某些关键时刻更应该注意,如:断奶前后,生喂料突然改为熟喂料.或熟喂料突然改为生喂料.不定时定量,忽饱忽饥.偶尔喂一顿酸食或喝一顿凉水等。因为这些条件极易使肠道微生物群发生平衡失调,导致溶血性大肠杆菌过度繁殖产生毒素,被机体吸收后而发生水肿。3.7 其他因素其它诱因如过早断奶、环境改变、疫苗接种、气候突变、运输、冷热刺激等应激原刺激仔猪机体也能使其对病原菌的抵抗力减弱,就引发了消化不良和腹泻.致使肠道正常菌群体系失调.也就导致大肠杆菌等有害菌大量繁殖.造成水肿病的发生。4、临床症状4.1 最急性型本型少见,突然发病,卧地不起,全身肌肉及四肢抽搐,口角流涎,吐沫,呼吸极度困难迅速死亡。多数见不到症状,突然死亡,病程仅1—2h。4.2 急性型本型多见,常为急性发病,有的食欲减退或完全停止,体温一般正常,有的高达40.5℃ ,共济失调,无目的乱冲、乱撞或作转圈运动,有的两前肢跪地,后肢直立或四肢下卧,突然向前猛跃。不能站立或爬行,强迫行走时,四肢乱蹬。有时发生呕吐,皮肤有水波动感。其主要特征是:眼睑严重水肿,颈部、头部发“胖”或水肿,其次是神经症状:精神迷乱、共济失调。病程一般12—24h。4.3 慢性型本型少见,头部、眼睑水肿明显,精神萎顿,卧地不起。病初时及时对症治疗可痊愈。最后消瘦、衰竭而死亡,病程2–4天。5、病理变化5.1 临床病理剖检变化最急性变化不明显或不见病变。急性型和慢性型基本相似。主要剖检病变是胃壁水肿,胃大弯和贲门部水肿尤为明显,水肿部位明显变厚,切面见肌层和粘膜之间有无色透明的胶冻样水肿液,胃底弥漫性出血。肠系膜特别是结肠系膜水肿,肠系膜淋巴结肿胀、充血、切面湿润多汁。十二指肠及空肠粘膜弥漫性充血,大肠粘膜呈卡他性肠炎景象。心包、胸腔、腹腔有较多积液。肺脏隆膨,肺胸膜下有散在的出血灶,肝脏稍有肿大,色泽变黄,有时可见其表面有不规则的灰白色病灶。脾脏稍肿大,有时可见脑膜水肿,脑干部有两侧对称的软化灶其它组织未见明显病变。5.2 病理组织学变化该病组织病理学比较突出的病变为浆液性非化脓性脑炎、浆液性心包炎、浆液性变质性肝炎、浆液性脾炎、浆液性出血性淋巴结炎、浆液性纤维素性出血性肺炎、浆液性胃肠壁炎等。5.3 超微病理学变化回肠绒毛排列紊乱、极性丧失,微绒毛稀疏和变性,有些部位的微绒毛脱落消失。肠吸收上皮的细胞膜起庖、破裂,偶见胞浆外溢;内质网扩张,线粒体肿胀,嵴明显破裂,溶酶体数目增加;细胞核尚完整,核仁数目增多,染色质边移。肝脏核仁增大,异染色质边集,核周围间隙增加。线粒体肿胀,滑面内质网弥漫性增生。淋巴细胞变性、坏死,并出现嗜酸性小体。淋巴窦极度扩张,其内网罗有大肠埃希氏菌及其残骸。细胞膜结构出现损伤。这些变化都是大肠埃希氏菌所释放的内毒素所致。6、诊断根据流行病学特点、临诊症状、剖检变化结合细菌学检查进行诊断。6.1 实验室诊断6.1 .1 镜检取病料做组织触片,镜检,可见有杆菌存在。6.1 .1 细菌分离培养分别无菌采取肝脏、小肠、颌下淋巴结、肠系膜淋巴结划线接种于普通琼脂培养基、麦康凯培养基、鲜血琼脂培养基、三糖铁培养基上,37℃培养24 h。在普通琼脂培养基上,可见灰白色、光滑、湿润、边缘整齐、圆形、稍隆起的小菌落;在麦康凯培养基上,可见圆形、红色的小菌落;在鲜血培养基上有溶血现象。将麦康凯培养基上生长的菌落穿刺接种到三糖铁斜面培养基上,培养基呈黄色,并有气泡产生。取菌落涂片,革兰染色,镜检,可见革兰阴性、平直、两端钝圆的小杆菌。6.1 .2 动物试验取麦康凯培养基上生长的菌落接种到肉汤培养基中,37℃培养24 h。取0.2一O.5 mL肉汤培养物注射到3只健康小白鼠的腹腔内,结果第1天就死亡1只,第2天又死亡2只。死亡后观察其病理变化,并分别取肝、肠、肠系膜淋巴结划线接种于麦康凯培养基上。37℃培养24 h,菌落形态同3.2。取上述菌落涂片镜检,革兰染色,可见革兰阴性、平直、两端钝圆的小杆菌。6.1 .3 生化试验将麦康凯培养基上的红色菌落移植到普通琼脂斜面培养基上进行纯化培养,然后做生化试验,结果该菌能分解葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、阿拉伯糖、乳糖、鼠李糖、山梨醇等,并产酸产气;不产生H:S;不利用枸橼酸钠;靛基质、M.R.试验阳性;硝酸盐还原试验阳性;V~P试验阴性;不液化明胶。生化试验结6.2 细茵学检测6.2.1 取病死猪肝、脾和淋巴结抹片染色镜检,会发现有少量散在的两端钝圆的革兰氏阴性短杆菌。6.2.2 取病料接种于培养基上37℃恒温培养,24h观察结果。6.2.2.1 在普通培养基上长出光滑、灰白、湿润、圆形边缘整齐、稍隆起的小菌落。选择的典型菌落,在麦康凯和5%的鲜血琼脂培养基上。麦康凯培养基上呈红色菌落,鲜血琼脂培养基上菌落周围有溶血环。6.2.2.2 发酵葡萄糖、乳糖、甘露糖、麦芽糖,不发酵木糖、蔗糖、鼠李糖,不分解尿素,不产生H 。6.3 鉴别诊断依据本病的流行规律,临床症状和剖检变化,一般可作出诊断。但如果变化不明显,而又有广泛的充血或出血病变时则应与猪瘟、猪丹毒相区别。水肿病一般多发于断奶后的仔猪,体温不升高,而猪瘟可侵害各种年龄的猪只,丹毒多见于架子猪,并导致体温明显升高,剖检猪瘟和丹毒都具有特征性的病理变化,故不难区别。本病可从小肠前段分离出大量溶血性大肠杆菌,而血液和实质器官一般无菌;猪丹毒可从血液和实质器官中分离出丹毒杆菌。7、防治措施7.1 减轻仔猪断奶后营养应激的影响合理的早期断奶可提高母猪的繁殖能力,加快仔猪的生长。但早期断奶对仔猪来说是一种应激,主要包括3个方面,一是母子分离的心理应激:二是仔猪从分娩舍到保育舍的环境应激;三是仔猪营养从母乳转向饲料的营养应激。国内外专家对这3种应激都作了一些研究报道,其研究结果表明,这3种应激中以营养应激最为强烈,影响也最大,而心理应激和环境应激的影响则较小。为此,则应在断奶前及早开始补料来过度适应。实践证明,从7日龄开始,用乳猪料诱食,使仔猪在断奶前能适应植物性饲料。胃肠消化机能得到适应、锻炼和加强,断奶后1周内不要更换饲料,1周后采取逐渐换成仔猪料的方法,可以减轻仔猪断奶后营养应激的影响。7.2 降低仔猪饲料中的蛋白质含量仔猪早期断奶后胃酸分泌少。各种蛋白酶的活性低,尤其不适应植物性蛋白质高的饲料。因此,断奶后3周内仔猪饲料中蛋白质的含量不应高于19%,其中植物蛋白不应高于15%。7.3 应用酸化剂仔猪断奶后1个月内在饲料或饮水中添加%–1.50%的柠檬酸(乳酸和食醋也可),提高胃内酸度,既适合有益的乳酸杆菌的繁殖,又能抑制有害大肠埃希氏菌及其他病原菌的滋生繁殖,还可提高消化酶的活性,对控制水肿病和仔猪腹泻都有明显的效果。值得大力广。7.4 补铁仔猪常常发生缺铁性贫血现象,缺铁性贫血不仅影响仔猪的正常生长发育,还会引起继发感染大肠埃希氏菌,导致腹泻和水肿病的发生。为此,仔猪应在3日龄内股内侧注射牲血素、铁钻针、丰血宝等补铁补血剂。7.5 补硒在饲料中添加亚硒酸钠一维生素E添加剂,或肌肉注射亚硒酸钠注射液,亚硒酸钠一维生素E缺乏,机体免疫器官遭过氧化物破坏,使机体抵抗力下降,并改善饲养管理,不仅可以预防白肌病、仔猪肝营养不良和桑葚心等病的发生,而且还对仔猪水肿病有一定的预防和治疗作用。7.6 药物预防常用的药物有杆菌肽锌、土霉素、金霉素、痢特灵、喹乙 醇、新霉素、喹诺酮类、一磺胺类等,使用药物饲料添加剂,对预防仔猪腹泻和水肿病有一定效果。7.7 疫苗预防目前国内已有许多科研单位和厂家研制生产水肿病疫苗和预防仔猪黄、白痢的菌苗,所有这些疫苗都可预防仔猪的大肠杆菌病。我们采用哈尔滨兽医研究所生产的K88、K99基因工程苗在仔猪断奶前、后给仔猪皮下注射1/4头份~1/3头份,发现不仅使仔猪断奶后腹泻降低了90%以上,而且仔猪水肿病的发病率明显下降。我国采用四川农业大学动物科技学院微生物室研制的仔猪水肿、副伤寒二联灭活菌苗(中试产品),给临产20d的怀孕母猪和15日龄以上的仔猪每头肌肉注射2ml,使仔猪水肿病的发病率和死亡率都下降了约30%。因此,应用疫苗预防该病效果明显,费用也较低,值得大力推广。7.8 断奶前后驱虫在仔猪断奶前后使用各种驱虫剂驱虫,可以避免寄生虫侵蚀肠粘膜,防止大肠杆菌侵人破损肠粘膜,从而可减少仔猪水肿病和腹泻的发生。7.9 消灭传染源隔离病猪,搞好猪舍卫生,每天清理粪尿,定期严格消毒,圈舍内不积尿,不存污水,安装自动饮水器等都有利于控制本病的发生和流行。7.10 水肿病的治疗仔猪水肿病难治,但不是不可治,治疗的关键是早发现、早诊断、早隔离、早治疗。临床实践证明,使用抗菌消炎药加维生素C,具有较好的治疗效果,同时要尽量减轻对病猪的,惊扰。7.10.1控制全身症状将磺胺嘧啶钠按每千克体重20–25mg和50% 葡萄糖10ml混合耳静脉注射,硫酸卡那霉素2-4ml、维生素C 6ml、维生素B 2–3ml和50% 葡萄糖10ml混合一次耳静脉注射,每天2次,连用2–3天。消除水肿应选用20%甘露醇100–150ml耳静脉注射。保护心脏用10% 安钠咖4 m1肌肉注射。7.10.2巩固预防对病情好转的仔猪,为巩固疗效可选用氢化可的松20–50rag,或用氯霉素25万单位或庆大霉素6–8万单位肌肉注射,每天1次。为了预防同窝仔猪发病,选用磺胺嘧啶钠片剂喂服,每头每天1–1.50片,连服2–3天。8、治疗方法可采用中西药物结合和对症疗法,以抗过敏、消除水肿和抑制肠道致病菌协同进行,而且应及早诊断和早期治疗方可取得比较好的疗效。8.1 用20%复方磺胺嘧啶钠10ml或6甲氧磺胺嘧啶lOral,肌肉注射,每天2次,连用3—5天;5% –10%氯化钙和4%乌洛托品各5 10ml,混合后静脉注射;0.1%亚硒酸钠注射液深部肌肉注射,5 1Okg仔猪2—3ml,20kg以上仔猪5ral,严重病例隔5—6天重复用药1次。此外对病猪可应用敲类缓泻剂通便,以减少毒物的吸收,对治疗可起到积极作用。8.2 蒽诺沙星4—6ml,肌肉注射,每日2次,连用3天;0.1%亚硒酸钠3—4ml,深部肌肉注射1次,病重者隔5—6天重复注射1次。8.3 硫酸卡那霉素按每千克体重用药25mg肌注,每日2次,连用3天;5%葡萄糖200ml静脉注射,按猪病情需要和体型大小加减,每日2次,连用2天;内服中药:苍术15g,白术、酒芍、茯毛、枳壳各10g,官桂、桂枝、麻黄、广木香各6g、陈皮9g、甘草3g,水煎灌服,每日l剂,连服2天(30Icg体重猪的剂量)。8.4 维生素Bl2 –kg体重,板蓝根注射液0.6ml/kg体重,链霉素30mg/kg体重,三药混合肌肉注射;另亚硒酸钠维生素E0.3ml/kg体重,肌肉注射。每天2次,连用3天。配合中药:芒硝50g、大青叶25g、大黄25g、牵牛子2og、茵陈25g、栀子20g、胆草15g、茯苓15g、郁金15g、陈皮15g、JIlSb 15g、车前子15g、芦荟10g、瓜蒂10g,共为细末,开水3000rrd冲调,加红糖250g为引(以上为10头10kg重猪的剂量),一次灌服或让猪自饮,隔日1次,连用2次。8.5 中药赤商姜蒜散:赤小豆100g、商陆16g、生姜1O片、大蒜6个,水煎,胃管投服,每日1剂,一般1—2剂可愈。同时采用西药:肌注亚硒酸钠维生素E,首次10ml,次日减半;磺胺嘧啶钠、磺胺5甲氧嘧啶钠、板蓝根注射液各510ml,每天上下午交替肌肉注射1次;50%葡萄糖3O 6orTll、葡萄糖酸钙20 40ml、乌洛托品10ml、混合一次静注。便秘时可用肥皂水深部灌肠。痊愈后,为防止复发,除加强饲养管理外,可应用Bl2、维丁胶性钙、三磷酸腺苷各2ml混合肌洼,一般隔4天1次,连续2次,效果很好。8.6 鲜青枣叶10%、车前100g、糖30g、捣烂饲喂,病重无食欲者灌服,同时停喂饲料3—4天(只给喂药及饮水),有条件的进行放牧,加强运动。日服3次,连服3~4天可愈。9 、讨论9.1 仔猪水肿病的病原体一溶血性大肠埃希氏菌,存在于健康猪的肠道内,当断奶后的仔猪因母乳中的免疫球蛋白在机体中的消失,和由于气温突变,饲料中的蛋白质、淀粉含量过高,而含植物性蛋白质低的青绿饲料、维生素和矿物质的供给不足,都是发生该病的诱因。9.2 仔猪水肿病虽然在一年四季都可发生,但4~10月是该病的多发期。而气温突变是诱发该病的一个非常重要的因素。因此,每当北方冷空气南下,气温变冷时,应当及时做好猪舍的保温保暖工作。9.3 在临床实践中观察到,那些身体强壮、营养良好的仔猪先发病或死亡。我们认为诱发的机制主要是过食了高淀粉饲料和富含蛋白质精料,缺乏低蛋白的青绿饲料。由于断奶仔猪胃肠道消化机能发育不完全,胃酸分泌量少,各种蛋白酶的活性,当胃肠道接受很多浓厚的优质饲料时,在胃肠道内会发生异常发酵并产生有害物质,导致消化机能紊乱,这样,在抵抗力减弱的情况下,致病的溶血性大肠埃希氏菌乘机侵入,并大量生长繁殖,产生大量的毒素而致病。因此,断奶前后的仔猪应减少饲喂高淀粉和富含蛋白质的精料,而要多喂些含植物蛋白质少的青绿多叶饲料,适当补充维生素和矿物质是十分必要的。9.4 对于仔猪水肿病的治疗,目前还没有特效的治疗药物。如果能够做到早预防、早发现、早诊断、早治疗,可收到较为满意的效果。9.5 用仔猪水肿病疫苗预防接种是目前预防该病的重要方法,而采取综合性预防措施效果更佳。参考文献:[1]毕可东、宋春阳等.仔猪水肿病的诊治.中国兽医科技.2000,(5): 35— 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梁朝伟可爱
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