种质资源毕业论文

收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.

建立“名、优、特”烟叶产区 提高烟叶品质和可用性 所在院校：云南省广播电视大学烟草分校 所学专业：农业技术推广2002级烟草种植专业 指导教师：徐江明 学生姓名：赵英佑 学号：029370017 论文完成时间：2003年9月6日 关键词 烟叶；产区；品质；可用性 我国种烟历史悠久，长期的市场选择、烟草种性变异和栽培条件的演变，形成了晒烟、晾烟、烤烟等多种类型。广东南雄晒红烟，湖北黄岗晒黄烟，吉林蛟河晒烟，甘肃、新疆莫合烟等久负盛名。建国后又成功地引进了香料烟和白肋烟，尤其是在国家烟草专卖局的扶持下，逐步形成了一批优质烟生产基地。但在几十年的发展过程中，由于片面发展烤烟而忽视了其它类型烟叶，使很多优良的晒晾烟资源丢失或绝迹。在烟叶高农特税及多种附加税的诱导下，各地政府积极发展烟叶生产，致使不适宜区劣质烟叶也挤占了市场，适宜区由于缺乏正确的技术引导，使我国烟叶的“量”和“质”均不断出现大起大伏现象。同时在多种生态条件下共同追求一个技术模式和质量目标的做法，使有突出质量风格的烟叶走型变味，相当比例的烟叶因与市场脱节而成为库存。随着人民生活水平的提高，消费者对烟气安全性的要求也越来越高，面对加入WTO后国外卷烟对我国市场的冲击，必须尽快调整种植布局，优化烟区结构，建立名优烤烟、白肋烟和香料烟生产基地，筛选恢复传统晒晾烟名品，使我国烟叶生产整体质量达到国际水平。 1 世界先进产烟国烟叶生产概况 国外的烟区划分是以环境条件和烟叶质量为依据，通过自然选择形成优质烟区。不同烟区的环境条件造成了烟叶质量风格的差异，将这些烟区分型，卷烟工艺配方人员则可根据不同类型烟区烟叶的质量风格进行配方。美国的烤烟约51%种植在北卡罗莱纳州，弗吉尼亚、北卡罗莱纳、南卡罗莱纳、佐治亚4个州的烤烟约占全美的91%［1］。在美国的分级标准中把这些产烟区分11型、12型、13型、14型［2］。肯塔基州的白肋烟约占全美的53%［1］，田纳西州约占，其它产区只有零星种植。因此，市场选择起到了优化烟区形成的作用。P�6�1M、BAT、大陆等烟草公司在收购季节就到拍卖市场直接购烟叶。不适宜的产烟区因产品没有市场已被逐步淘汰，故美国的烟叶种植纯粹是由市场选择。各大烟草公司除自身具有雄厚的技术力量外，为了购买到优质烟叶，给产地的州立大学提供大量的科研和技术推广经费，以改进生产技术，提高烟叶质量。巴西的烟区主要分布在巴拉那、里奥格兰德和桑塔卡塔里那南部3个省，北部种植面积仅占巴西的5%［3］。这些烟区被十几家烟草公司瓜分，在各公司的辖区里，由公司负责技术指导，提供贷款和物资供应，生产的烟叶由所属公司收购。土耳其的烟农种植烟叶要有许可证，试种3年被政府认可后方可获得种烟资格。 世界优质烟生产国的种植布局大多已固定，科学研究的主要任务是不断改进生产技术以提高烟叶质量，如防治病虫害提高烟叶生产保险系数，提高自动化程度以降低劳动强度，提高吸烟安全性，利用生物技术调节烟叶的化学成分和提高烟草抗病性等。 2 我国烟叶生产中存在的问题 我国烟叶生产经过几十年的发展，年种植面积发展到100万公顷左右，年收购量180万吨左右，加上晒晾烟年收购量可达到200万吨左右，较好地满足了我国卷烟工业和出口的需要。但与发达国家相比较，我国的烟叶生产还存在很多问题需要尽快解决。 烤烟独占鳌头 卷烟产品需要烤烟、晒晾烟、白肋烟、香料烟等多种类型的原料，尤其是混合型卷烟要求晒晾烟的比率较大。多年来，我国烤烟型卷烟发展很快，为满足烟叶总量的需要，下达烤烟种植计划较多。地方政府为获取较多的财政积累，对种植面积的保证措施也较多。同时因为烤烟调制需时短，受气候影响较小，烟农也乐于种植。这些原因造成烤烟面积和总产不断增加。与此同时，种植历史悠久，种质资源丰富的晒晾烟则逐步萎缩。20世纪70年代末期尚有1600个县种植，其产量约占烟叶总产量的16%，但由于卷烟工业需求量小，使其长期得不到重视，大部分地区没有纳入国家计划，致使面积缩减，产量减少，质量下降，许多优良品种失传。这种状况与当前卷烟工业发展对晒晾烟的要求不相适应。 不适宜区和次适宜区种植面积过大 烟草喜温、喜光，适宜种植在光热资源充足和微酸性土壤条件下，我国很多省区的自然条件适合烟草种植，但很多不适宜和次适宜区也在种植烟叶。西北部低温冷凉、土壤偏碱，不适宜种植烟草，但仍有不少地方种烟。近年来新疆在发展了一定规模的香料烟后，在伊犁和石河子地区种植了烤烟，烟叶难以正常成熟，少香无味。黄淮烟区覆盖面大，其中土壤pH值超过8的地区很多，有的甚至已盐渍化，但烟叶仍有普遍种植。在不适宜区、次适宜区或在适宜地带的非适宜区中生产的劣质烟叶通过搭配销售等手段，使烟叶进入卷烟配方或变成无效库存，降低了行业的经济效益。 生产模式单一，不适销烟叶比例较大 多年来，我国烟叶生产主要是以指令性计划方式安排，只有面积、收购量的计划，而没有分类型、分档次的生产计划，因此，形成了目标、质量单一的生产局面。20世纪70年代追求烟叶高产，形成了品种多、乱、杂，种植密度过大，营养不合理等技术问题，全国烟叶整体质量为叶小、片薄、油分差、烟碱含量低，少香无味。进入20世纪80年代烟叶生产以提高单叶重、烟碱含量为目标，但矫枉过正，致使20世纪90年代初期出现烟碱含量过高的问题。截止目前，上等烟缺口仍较大，不适销烟叶的工商库存达50万吨以上，上部叶比例达40%以上。 土壤贫瘠化，烟叶整体质量低 我国烟叶香气量不足的主要原因之一是农业生态环境的改变，小型农机具代替了耕牛，牲畜粪肥减少了，作物秸杆大多就地焚烧，使宝贵的有机肥资源流失且污染了环境，造成土壤贫瘠化。在目前优质烟生产基础较差的情况下，为了尽可能地提高烟叶香气质量，有必要深入研究烟叶香气与土壤有机质的关系，从中确立能够产生较好香气的土壤有机质阈值，采用新的技术手段弥补土壤缺陷，建立与我国生态环境相适应的烟草施肥技术体系。 缺乏重点，名区不名 1985年《全国烟草种植区划研究报告》中提出，在滇中、滇东、黔北、闽西建立优质烟生产基地，在湘南、豫中、豫西、鲁中、淮南等地建立烤烟生产基地，在湖北、四川建立白肋烟生产基地等。从工业需要情况看这些产地的商品竞争力较强，但由于缺乏政策倾斜和技术指导，使得烟叶生产也随着全国的生产情况而改变，近年来滇中、滇东烟叶烟碱含量较高，贵州烟叶也因面积和总产大起大伏而使整体质量水平受到影响，黄淮烟区的烟叶销售形势也不乐观，造成了优质产区名烟不名。 3 开发“名、优、特”烟区的思路和技术路线 调整生产布局，优化烟区结构，划分生产区系 在烟叶种植分布普查的基础上，根据“生物相似论”以生物体反应(如烟叶评吸结果)为主，结合生态因素的综合评估，推测“气候”相似，选择烟区，划分生产区系。根据分区结果和烟叶质量风格进行香吃味品质的分型定位，并制定相应的定向栽培技术，从而实现优质烟叶综合配套生产技术的集成创新。通过“名、优、特”烟叶的研究和开发，重新优化种植布局，让生态条件好的产区名起来，使不适宜区、次适宜区限期逐步压缩，直至淘汰。立项开展全国不同生态区气候、土壤调查分析及烟叶品质测试分析研究；制订全国范围内的烟叶品质区划、品质分型及定向栽培技术方案；提出混合型主料烟、烤烟型主料烟及填充料烟的品质指标、适宜产区和生产技术方案。 筛选健全类型品类，满足混合型卷烟开发的需要 目前仍有较大种植面积的湘西晒红烟，云南腾冲晒烟，广东南雄、连县、鹤山晒烟，黑龙江亚布力晒烟，吉林蛟河晒烟等，且有较大开发价值，能够满足我国混合型卷烟对晒晾烟的需要。湖北建始、鹤峰，重庆达州、万州、宣汉的白肋烟，云南保山、新疆石河子、湖北十堰的香料烟均已具备了较好品质，要通过进一步研究开发，建立起我国白肋烟、香料烟的优质产区。 提高烟叶生产整体水平，增强烟草行业的竞争力 通过调整生产布局建立的生产区系要具备良好的烟叶生态条件，在此基础上通过改良土壤环境，建设水利、调制等基础设施，优化物资供应和提高烟农素质等措施，提高烟叶生产的整体水平。工业企业可根据各类型烟叶的产地及质量风格，挑选适宜的烟叶原料，创立名牌卷烟，提高产品质量的稳定性，增强我国卷烟产品的市场竞争能力。 工农业相结合，边评价边改进 “名、优、特”烟叶的研究与开发工作应坚持与卷烟工业的紧密结合，从光、温、水、土等自然环境角度选择优质烟区的同时，应由卷烟工业提出选择和评价意见，以实现烟区的逐步优化，市场的循序集中。烤烟、晒晾烟、白肋烟、香料烟等类型均应采取一边研究，一边评价和工业验证，一边大规模开发的做法，使其尽快形成名产和规模。 开展国际合作 在国际市场上，市场选择、优胜劣汰的经济规律使烟叶生产步入了较高水平。在“名、优、特”烟叶的开发过程中，应积极引进国际市场的质量观念，并尽快与之接轨。同时，邀请跨国烟草公司参与开发和烟叶质量的评价、论证，借助于其雄厚的技术力量，提高烟叶生产的整体水平和技术人员的素质，力争把我国不同类型的烟叶尽快推向国际市场。 参考文献 ［1］赵献章.中国烟叶分级［M］.北京：中国科学技术出版社，1991. ［2］刘卫群.巴西烤烟生产技术考察报告［R］，2000. ［3］王宝华，吴帼英.地方晒晾烟普查鉴定及利用的研究［J］.中国烟草学报，1992，(2)：45-54.

你的问题好多啊。

bu zgid

用RAPD分析行吗？论文应当是需要的方向才需要做，像你说的“叶长，匍匐茎长，绿期”这些观察指标如果遗传距离分析结果不一致怎么办？个人觉得并行观察指标应当少一些，选择最能代表进化顺序的性状，但是在领域之内需要深入一点。样本采集地点应当有代表性，有时候人为划定的城市，聚类分析结果未必正确，应当以地形地貌作为参考依据，考虑可能的种群分化比较合理。一点愚见，供参考