MyronKiven
乙醇引起的变性与沉淀 取3支试管,编号。依顺序加入试剂: 试管一: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、pH4.7缓冲溶液各1mL 试管二: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的NaOH溶液各1mL 试管三: 5%卵清蛋白溶液、95%乙醇、0.1mol/L的HCl溶液各1mL 振摇混匀后,观察各管有何变化。放置片刻,向各管内加水8毫 升,然后在第2、3号管中各加一滴甲基红.再分别用0.1当量/升醋酸溶液及0.1当星/升碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1当量/升盐酸溶液数滴,观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。首先,只有高浓度乙醇长时间作用才会使蛋白质变性,低浓度的乙醇会使蛋白质的亲水结构(氢键)破坏而沉淀析出,类似于盐析。其次,变性的蛋白质是不会再溶于稀酸或稀碱了,应为变性即意味着结构的永久改变。你的试验中乙醇的最终浓度是95%*1ml/3ml=32%,而且最后蛋白会再溶解。因此,这个实验不足以证明蛋白质变性。后来继续加盐酸是为了使pH值偏离等电点,增大蛋白质的溶解度,进而使蛋白质再溶解。
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蛋白质的空间结构发生变化,从而引起蛋白质理化性质和生物功能改变。
乙醇在医学方面可做为一种消毒剂,乙醇作用于细菌细胞首先起到脱水作用,乙醇分子进入到蛋白质分子的肽链环节,使蛋白质发生变性沉淀;这种作用在70%的含量下显得更强。乙醇可导致蛋白质分子间易形成氢键。
变性原因:
变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和三级结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮等;能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及X射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。
以上内容参考:百度百科-蛋白质变性
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方法原理:往蛋白水溶液中加入中溶性有机溶剂,如乙醇丙酮等,主要是降低水分子的活度,降低溶液的界定常数,从蛋白分子周围排斥水分子,使蛋白分子之间通过急性集团的相互作用,在范德华力作用下发生凝聚,不过由于有机溶剂存在,降低了蛋白分子表面疏水基团的作用,因而引起蛋白分子凝聚。影响因素:第1乙醇使蛋白质分子脱水,第二ph值蛋白质在等电点时易于沉淀。第三,电解质浓度在低离子浓度下对蛋白质溶解度有较大影响,第四,蛋白质浓度浓度越低,其沉淀作用越小。第五温度,在低温下可以避免乙醇对蛋白质的变性作用,同时蛋白质溶解为吸热反应,溶解度随温度上升而增高。
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