手工皂药学论文

液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 下载带有 Google 工具栏的 Firefox， 上网冲浪更惬意 作者; 姜维，方晓明，唐毅锋，庞国芳 【摘要】 目的 建立脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留量的测定方法。方法 色谱柱：Kromasil C18（250mm×，5μm）；流动相：乙腈-水（65:35）；流速：；柱温：35℃；检测波长：292nm；进样量：40μl。结果 样品的室内加标平均回收率为％～％，室内相对标准偏差为％～％，室间加标平均回收率为％～％，室间相对标准偏差％～％，定量测定低限（LOQ）为10μg/kg。结论 本方法简便，准确，可用于脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留含量的测定。 【关键词】 高效液相色谱法;脂肪;醋酸美仑孕酮;醋酸甲地孕酮;醋酸氯地孕酮 Determination of progestones in fat of beef and pork by HPLC 【Abstract】 Objective To establish the determination method of melengestrol acetate，chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and Chromatographic separation was carried out on a C18column（250mm×，5μm）and acetonitrile-water (65:35) as the mobile flow rate was ; the column temperature was 35℃; the detection wavelength was 292nm; the injection volume was 40μ The intra-laboratory average recoveries ranged from ％～％ and RSD of ％～％.The inter-laboratory average recoveries added to standard ranged from ％～％ and RSD of ％～％.The lowest limit of quantitation (LOQ) is 10μg/ The method is simple and is suitable for the determination of melengestrol acetate，chlormadinone acetate and megestrol acetate in fat of beef and pork. 【Key words】 HPLC; fat; melengestrol acetate; chlormadinone acetate; megestrol acetate 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮为合成的孕激素类药物，有明显的孕激素和抗雄激素作用，可抑制排卵。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用，动物实验表明有死胎率增加和致畸作用，副作用有：(1)恶心、头晕、倦怠；(2)突破性出血；(3)孕期服用，会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质沉积和改善生产性能，可以很快产生显著和直接的经济效益，因此，对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途)已有很长的历史，但人类长期食用含有激素的肉制食品，即使含量甚微，亦会明显影响机体的激素平衡，而且有致癌危险，对幼儿造成发育异常等危害。因此，开发一种能检测孕酮残留量的方法是十分必要的。 检测孕激素类药物的方法有很多，如液相色谱/质谱法（LC/MS）〔1〕、气相色谱/质谱法（GC/MS）〔2，3〕和液相色谱法〔4～6〕等。本文采用高效液相色谱法对牛和猪脂肪样品中的孕酮进行检测。 1 试剂与仪器 试剂 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品（Sigama公司），乙腈（HPLC级），甲醇（HPLC级），乙酸乙酯（HPLC级），其他试剂为分析纯。水由Milli-Q净化系统（Millipore公司）制得。 （1）标准储备液：1000μg/ml，分别准确称取醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准品于50ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用一年。 （2）混合中间溶液I：100μg/ml，分别吸取醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮标准储备液于100ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用一年。 （3）混合中间溶液II：μg/ml，取混合中间溶液I于100ml容量瓶中，用甲醇定容。于4℃保存，可使用半年。 （4）混合标准工作液：分别吸取10、20、40、80、100μl混合中间溶液II添加到980、970、950、910、890μl的乙腈-水（65:35）中，再加入10μl 盐酸溶液，混匀，得到浓度为μg/ml、μg/ml、μg/ml、μg/ml和μg/ml混合标准工作液，供液相色谱测定，当日使用。 仪器 Waters液相色谱系统，510泵体，486紫外-可见光检测器，Emprower pro色谱软件。氮气吹干仪（Organomation Associates，Jnc.公司）；固相萃取装置（Supelco公司）；低温离心机（德国Eppendorf公司）；涡旋混匀器（XW-80A型，上海医大仪器厂）；CN固相萃取柱（3ml，Waters公司）。 2 测定步骤 试样的制备与保存 试样的制备 把大约5g的猪或牛脂肪组织切成小块，然后放入底部塞有玻璃棉的漏斗中，放入150ml的烧杯中，将烧杯置于微波炉内。根据所熬制脂肪量，使用最大功率，加热30～60s，如果脂肪没有融化，可在间隔30～60s以后重复加热30～60s，直到有液体脂肪流出，通过漏斗滴入烧杯中。把熬制好的脂肪油放入样品瓶中，密封，并做上标记。 样品的保存 把熬制好的脂肪油样品置于-18℃中，冷冻保存。 提取 称取熬制好的脂肪油±，置于50ml具塞离心管中，加入5ml乙腈，于60℃水浴中保温3min以使固体脂肪溶化，涡旋振摇1min，在-5℃下离心7min（离心力1160g），吸取上清液至15ml带塞聚丙烯离心管，再在沉淀物中加入5ml乙腈重复提取一次，合并上清液。在合并的乙腈提取液中加入2×2ml正己烷，涡旋振摇1min，于-5℃中离心5min（离心力1160g），弃去正己烷层。乙腈提取液于60℃中用氮气吹干仪吹干，残渣待皂化。 皂化 在残渣（项）中依次加入4ml正己烷、1ml 氢氧化钠溶液和氯化镁溶液，于涡旋混匀器上快速混匀10s，在60℃水浴中保温15min，于-5℃中离心5min（离心力1160g），吸取上清液至15ml玻璃试管。在沉淀物中再加入4ml正己烷混匀后，在60℃水浴中加热15min后，在-5℃中离心5min（离心力1160g），合并上清液。于60℃中用氮气吹干仪吹干，用正己烷溶解残渣，待净化。 净化 将皂化后的样液（项）倒入经5ml乙酸乙酯和6ml正己烷预处理过的CN柱中，用2×1ml正己烷润洗玻璃试管，洗液倒入到CN柱中。待样液流过后，依次用5ml正己烷和6ml 5%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗柱子，随后打开真空泵将小柱中液体抽干，保持抽气2min。最后用 20%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱，洗脱液收集于15ml玻璃试管中，于60℃中用氮气吹干仪吹干。残余物用990μl乙腈-水（65:35）涡旋溶解，静止15min后，加入10μl 盐酸溶液，混匀，供液相色谱测定。 测定 液相色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（250mm×，5μm）；预柱：C18柱（×，5μm）；流动相：乙腈-水（65:35）；流速：；柱温：35℃；检测波长：292nm；进样量：40μl。 液相色谱测定 根据样液中3种孕酮的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，标准工作液和样液中3种孕酮的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，标准品的色谱图见图1。 图1 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮的色谱图（100ng/ml）1-醋酸甲地孕酮，2-醋酸氯地孕酮，3-醋酸美仑孕酮 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 免费论文网 3 结果与讨论 线性范围 醋酸美仑孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮浓度在～μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，其相关系数（γ2）均大于。 回收率、精密度和定量检测限 本实验以2种脂肪（牛脂肪和猪脂肪）作为样本。取适量标准品加入到样品中，使添加量相当于10、20和50μg/kg，每个添加水平各取24份试样（每种脂肪各12份）。图2为空白脂肪样品和添加样品（10μg/kg）的色谱图。表1为醋酸美仑孕酮，醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮外标法测得的室内回收率和精确度。表2为8家实验室的室间回收率和精确度结果。根据回收率试验，能可靠测得的最低浓度确定定量检测限（LOQ），LOQ为10μg/kg，满足残留限量的检测要求。 （A） （B） （C） （D） 图2 空白脂肪样品和添加样品（10g/kg）的色谱图A：牛脂肪空白样；B：猪脂肪空白样；C:牛脂肪添加样；D:猪脂肪添加样 表1 室内回收率和精确度的结果 (每一添加量，n=24) 表2 8家实验室室间回收率和精确度的结果 (每一添加量，n=32) 【参考文献】 1 Hooijerink H，van Bennekom EO，Nielen for gestagens in kidney fat using accelerated solvent extraction and liquid chromatography-electrospray tandem mass Chim Acta，2003，483(1-2): 51-59. 2 Neidert EE，Gedir RG，Milward LJ，et and qualitative confirmation of melengestrol acetate residues in beef fat by electron-capture gas chromatography and gas-chromatographic chemical-ionization mass Agric Food Chem，1990，38(4): 979-981. 3 Impens S，Courtheyn D，de Wasch K，et analysis of anabolic steroids in kidney fat by downscaling the sample size and using gas chromatography-tandem mass Chim Acta，2003，483(1-2): 269-280. 4 Gaver RC，Movahhed HS，Farmen RH，et procedure for the quantitative analysis of megestrol acetate in human Pharm Sci，1985，74(6): 664-667. 5 Overdiek JWPM，Hermens WAJJ，Merkus of the serum concentration of spironolactone and its metabolites by high-performance liquid Chromatogr B，1985，42(2): 279-285. 6 Campbell HM，Sauve determination of melengestrol acetate in AOAC Int，1993，76(6): 1163-1167. 液相色谱法测定猪和牛脂肪中孕酮残留量 来自: 思想汇报网参考资料：

芳香疗法的起源和发展手工皂女王Maggie 已关注 字数 2340 · 阅读 96 2017-10-21 08:53 芳香疗法的起源      我们都知道中医是全世界最古老的医学，自古以来人们便开始使用药用植物来治疗疾病，医治伤口。药用植物应用在医学上的成果相当显著，也因此流传了数千年之久。          我们可以这么说，过去5000年来，在亚洲的中国及印度早就已经开始使用芳香疗法了，只是对于药用植物的有效成分萃取的方式与现行的芳香疗法不同而已。西元前4000年，埃及人使用雪松、穗甘松、没药、乳香、肉桂等精油来作为木乃伊的防腐之用，甚至在古老的莎草纸上也记载了古埃及时期的日常生活中如何应用草药植物。西元前3250年的图坦卡门陵墓中更发现了焚烧的树脂，最神奇的是这些树脂到今日仍然散发着香气。    在科学尚未普及与发达的年代，由与缺乏对精油组成物质的分析能力，因此尽管有了相关的萃取技术，但精油仍然只被当作是能制作成香水的原料而已，随着科学脚步的迈进并推动了现代医学的发展之后，这个现象才开始有所改变。      知名的阿拉伯医师阿比西那（avicenne）首先蒸馏出第一瓶100%的纯精油。为什么世上第一瓶精油会出现在阿拉伯呢？        这是因为阿拉伯商人大量引进各地的香料植物，并在欧洲发展出蓬勃的药用植物的市场规模，他们远赴亚洲寻找芳香植物并就近于自己的国土上大量繁殖。像大蒜、洋葱、药草植物及香料等等，都被视为具有极佳疗效的药用植物。这些植物的发展不再局限于烹饪用途而逐渐迈进了医学应用的层面。阿比西那医师参考了古波斯人的知识与技术，蒸馏机得以被发明出来，从此芳香疗法就成为阿比西那医师在医学著作里竭力推荐的疗法之一了。  芳香疗法简史 史前 焚香烟熏病患（或驱邪），食用芳香植物，使用药草浸汁与煎剂。         西元前4000年 雨河流域，古迹石板记载苏美人会使用芳香植物。   西元前3000年 埃及，古老依迪芙神殿中，莎草纸文献与石碑记载了埃及人以植物香料制成香膏、香粉、香油、（洋茴香、雪松、丝柏、乳香、没药、莲花），应用在医疗、美容、制作木乃伊和宗教仪式。   西元前2000年 印度，《吠陀经》记载檀香、肉桂、芫荽、没药等多种药草在宗教和医疗上的用途。 西元前1500年 埃及，埃伯斯莎草纸文稿记载了数百种芳香药用植物、配方及医疗相关文献。 西元前400年 希腊，医学之父希波克拉底在著作中列出三百多种药草处方，并建立四大体液学说、提倡芳香泡澡。 罗马，使用香油、香膏沐浴美容、疾病治疗。 中国，《黄帝内经》相传为黄帝著作，但实是汇集历代先人的智慧，成书时间约在战国至西汉时期。对于大气、阴阳五行与植物的生态有详细连结。《诗经》记载常见药用植物。 西元前300年 希腊，哲学家泰奥弗拉斯托斯撰写《植物探究》，首开系统化描述植物之先河。 西元78年 希腊，医师、药理学家迪奥科里斯著有五大册的《药草志》，列出约六百种药草特性与处方，往后的一千多年始终广为流传，是现代药典的根基。迪奥科里斯还研制出蒸馏雪松精油的模型。 西元131-199年 罗马，医师、哲学家盖伦为解剖生理学写下不配著作，并建立植物的药学理论和主要分类，还发明了冷霜。 西元652年 中国，孙思邈著《备急千金要方》，记录了各种药方，并强调医德修为、临床医学的分类诊断。 西元865-925年 波斯，医师，炼金术师、化学家和哲学家拉齐，撰写数十本医药、炼金书籍。 西元980-1037年 波斯，阿比西纳《医典》中记录了超过八百种的药用植物，并运用按摩与食疗治病，改良蒸馏法，加入冷凝制程以萃取精油。 中国，王惟一，创制经络铜人。 10世纪 欧洲，罗马帝国衰落后的黑暗时代，药草治病的传统主要保存在修道院中。 12世纪 欧洲，十字军东征带回阿拉伯的香水和蒸馏设备，开始用欧洲本土的芳香植物来萃取精油。 德国，中世纪希德嘉修女，根据自身在灵性、音乐、星象、自然、医学方面的天赋，发展出结合身心灵的全方位自愈观念，并著有详细的草药典籍《Physica》。 14世纪 黑死病大流行，人们在街上焚烧乳香和松树预防感染。医师则穿着特殊服装，并在面罩乌嘴处塞满鼠尾草、百里香、薰衣草等，保护自己不被感染。 15世纪 欧洲，印刷术传入后，各国印制《药草志》，药商和药师会销售精油，大户人家则自备蒸馏房。 16世纪 瑞士，医师、炼金术士和占星师，以炼金术的概念，将精油蒸馏法发扬光大。 西元1525年 英国，《贝肯氏草药集》出版，其中还记载了玫瑰浸泡油的制法与应用。 西元1578年 中国，医药学家李时珍著《本草纲目》，提到多种花香类精油。 西元1616-1654 英国，医师和药草学家，出版《英国医师》和《药草大全》，内容是丰富的制药与药草知识。为普及医药，他致力于把希腊、拉丁文的医书译成英文，书中提及精油应用。同时，实验化学举起。 18世纪 欧洲，外科手术兴起，化学药物盛行，逐渐取代天然的植物精油与药草疗法。 德国，医师哈尼曼首创[顺势疗法]（同类疗法）。 西元1920年 意大利，医师盖提和卡由拉，实验证明吸闻精油可以舒缓中枢神经系统，对心理病症有疗效。 西元1926年 法国，化学家盖特福赛因为实验室爆炸后使用薰衣草精油治疗烧伤，发表了一篇论文，首创【芳香疗法】一词。 西元1930-1980年   法国，军医瓦涅二次大战期间在越南使用精油为伤兵治疗严重的烧烫伤口，回国后便用精油进行医疗，1980年出版《芳香疗法之临床医疗》，是法系芳疗始袓。 英国，医师巴赫创立以天然植物精华治疗身心灵问题的【花精疗法】。 西元1961年 法国，摩利夫人出版《青春的本钱》，英文版为《摩利夫人的芳香疗法》，将芳香疗法应用在美容护理上。她觉得精油透过皮肤或吸闻方式进入人体最有疗效，并发展出一套按摩手法，沿用至今。 西元1997年 英国，按摩师和护理师滴莎兰德出版《芳香疗法的艺术》，是英语世界的第一本芳香疗法专书，成为英国芳疗界的先驱。 西元1982年 英国，派翠西亚.戴维斯创办英国伦敦芳香疗法学校。 西元1990年代 从伦敦芳疗学校毕业的温佑君女士，将芳香疗法结合艺术，引进台湾，并于1998年成立【肯园】。 西元1996年 法国，医师潘威尔和化学家法兰贡合著《精确的芳香疗法》，此书是他们俩自1970年以来的研究成果总结，深具学术价值。 21世纪 大中华地区的芳香疗法市场有更多元且蓬勃的发展。