软糖的毕业论文

有雪莲花踪迹?但玛莎不是自怨自艾地等死,而是勇敢地向森林走去。她找呀找,手脚都被冻僵了,仍然不肯放弃。她的毅力和善良终于感动了森林精灵——十二个月,他们用四季的变幻和大自然的魔力惩罚了狠毒的后母和任性的小女王。

是的 1。work作动词的时候 在一般现在时中 做第三人称单数时 用works例：he works at a .名词时，是不可数的。 a piece of work一份工作 所以work作名词讲时事没有works存在的。附：work的意思及各种用法work[wE:k]n.工作, 劳动, 操作, 职业, [物]功, 手工, 作品, 机件v.(使)工作, (使)运转, 起作用, 造成, 产生, 经营, (使)渐渐移动, 煅制work[wE:k]n.工作, 劳动, 作业职业, 业务行为; 作用, 成效, 【物】功[常用复, 有时作a work]著作, (艺术)作品成果, 产品, 制作品, 针线活, 刺绣品[pl. ](建筑等)工程;【军】(防御)工事工件; 工作物; [pl.][用作单或复]工厂[pl. ]活动的机件工作质量; (发酵产生的)泡沫; [pl.]【宗】德行, 功德look for work找职业, 找工作The medicine has begun to do its work.药已开始起作用了。The villagers sell their work to tourists.村民们把他们的手工艺品卖给旅游者。workvi.(worked wrought [rC:t])工作, 干活; 做(at)运转起作用, 有成效缓慢而费力地进行(脸等)抽搐, 跳动激动, 翻腾; 不平静被加工, 揉捏发酵work at a new invention从事一项新的发明The plan worked well.这项计划很成功。The root worked down between the stones.树根在石缝间扎下去。His face worked with emotion.他激动得面部抽搐。The sea works high.海浪汹涌起伏。Yeast makes beer work.酵母使啤酒发酵。workvt.使工作, 使干活计算, 解决使转动, 开动, 操作; 经营, 管理, 主管[过去式和过去分词常用wrought]造成, 引起, 促使[过去式和过去分词常用wrought]影响; 说服; 劝诱费力地通过; 通过努力取得形成, 做成缝上, 绣, 织, 精工细做炼(铁); 揉(面等); 搅(黄油)[口]利用; 哄骗使(啤酒等)发酵耕作; 使芽接, 嫁接(on)使缓漫变化work an abacus打算盘work a farm经营农场work wonders创造奇迹work one's way of thinking说服某人使其与自己的想法一致work one's way through college靠做工读完大学work a sweater织毛衣work a friend for a loan骗借朋友的钱workadj.劳动的work camp(犯人)劳动营work clothes工作服work force(一个国家、地区或工厂等的)劳动力, 劳动大军workbagn.针线袋workbasket[5w\:kbB:skIt]n.针线筐workbench[5w\:kbentF]n.工作台workbook[5w\:kbJk]n.学生用的辅助练习册; 工作规程书; 工作手册workbox[5w\:kbRks]n.针线箱; 工具盒workdayn.工作日workfare[`w\:kfeE(r)]n.劳动福利计划work-folk(s)n.劳动者, 尤指农业劳动者workhand[`w\:khAnd]n.人手, 劳动力work-horsen.耕马, 驮马做重活的人结实有用的车辆或机器workhouse[5w\:khaJs]n.[英]济贫院; [美]感化院work-inn.到职罢工, 到校罢课(照常上班或上课, 但不按规章工作或学习)workmaten.工作伙伴work-outadj.(市场)疲软的workpeoplen.[英]工人workplacen.工作场所, 车间work-shyadj.怕工作的; 懒惰的workn.懒汉worksite[`w\:ksaIt]n.工地work-soiledadj.由于工作而弄脏的workstockn.农畜workstonen.(炼铅膛式炉)工作板workstudyn.工作效率的研究workticketn.工票work-to-rulen.[英]按章怠工(上班按章工作但消极怠慢的一种怠工方式)work-up[`w\:kQp]n.病情的检查; 印刷物表面的污迹workweek[`w\:kwi:k]n.工作周, 一周的总工时workwoman[`w\:k9wJmEn]n.女工, 女工作者workless[`w\:klIs] good day's work一整天才干得完的活A woman's work is never done.[谚]妇女的家务永远干不完。a work of longue haleine需长期付出极大努力的工作a work of time费时的工作all in the [a] day's work很平常的事All work and no play makes Jack a dull boy.[谚]只工作, 不玩耍, 聪明的孩子也变傻。at work在工作活动着; 运转着; 在起作用从事于(某项工作)dirty work at the crossed roads不可告人的勾当严重的困难尽兴玩乐do its work发生效力, 起作用get the works受残酷的虐待, 被痛打; 被欺骗give sb. the works严重地虐待某人, 臭骂某人谋杀某人全部告诉某人go about one's work着手工作seet about one's work着手工作go to work开始行动, 着手工作set to work开始行动, 着手工作gum up the works[口]把事情搞糟have (all) one's work cut out (for one)工作排得满满的, 忙得不可开交面临艰巨的工作He who will not work shall not eat.不劳动者不得食。in and out works不固定的工作in the works[口]在准备中, 在计划中, 在完成中in work有工作在完成中(马)正在训练lt won't work.[口]那不行, 那不起作用。make good work of sth迅速完成某事make good work with sth迅速完成某事make sad work of it把事情搞糟make light work of sth.毫不吃力地做某事make short work of很快完成; 除掉make quick work of很快完成; 除掉make sure work with sth.有把握地处理某事make (a) work吵闹; 找麻烦off work没有上班[工]oil the work给机器加油; 运用圆滑手段使事情顺利进行; 疏通out of work失业出故障shoot the works不遗余力孤注一掷work at从事, 致力于, 钻研work away继续干(脸上某部)抖动work in插进, 穿入搀, 加入为...安排适当的时间揉擦work into插进, 穿入搀, 加入为...安排适当的时间揉擦work in with[口]与...合拍, 与...配合[协调]work it[俚]完成, 做好(Work it! )滚蛋! 去你的吧!work off(使)逐渐消除; 处理(积压的工作等); 卖掉发泄做工偿清work on对...起作用, 对...有影响使人信服, 说服从事于, 致力于拧进[上]work out作出, 设计出, 制作出算出, 得出...答案, 解决算下来是(at)摸透某人的脾气产生某种结果掘进, 采完; 使精疲力竭训练, 锻炼做工赔偿(债务)work over彻底检查; 钻研重做, 改做殴打, 折磨work up逐步建立[树立]逐渐达到(to)鼓动, 唤起综合, 整理, 组织, 精心作成work with与...共事, 与...合作; 对...起作用academic work学术工作adhesional work【热】附着功aerated work充气糖果充气工作agency work广告商托印件air defence work防空工程alkali works制碱厂all-glass work全玻璃制品antenna works天线工程antic work怪诞作品; 以出于想象的怪诞人物、动植物形象构成的绘画antisubmarine work反潜工事apply work做功arched false work拱珙脚手架area frame work面积平分法art work书刊上的图片assembly work装配工作assigned work指定的作业astra work星花刺绣authentic work (of painting)(画的)真迹available work【物】可用功bank-protection work护岸工事belt-system work流水作业bench work钳工工作blown work吹气工作board-and-brace work(木工)镶接木板boasted work【建】刻石(槽)工boring work镗孔工作boring-mill work镗铣加工brain work动脑子bright work精加工cabinet work细木工家具作业cable works电缆厂; 电缆工程camera work摄影工作, 摄影技术capital works基本建设工程cargo(es) work装卸工作carriage and wagon works客货车工厂catch work【水】集水沟chair work手工玻璃成形, 自由吹制成形charity organization work慈善组织事业checker work格式装置chucking work卡盘工作civil work土建工程classical work古典著作classroom work课堂作业clerical work文书工作cohesive work内聚功cohesional work内聚功cold work冷作collar work繁重的工作, 艰苦的工作uphill work繁重的工作, 艰苦的工作collected works文集, 文选collective work集体创作color work[美]插图画家的工作complete work全集comprehensive work综合著作, 大部巨著, 大全compulsory work必修作业conceptual work思维活动condensing works冷凝装置conduit work电线管道工程construction work施工工程consumed work消耗功contract work包工controlled work测验作业, 平时测验course work课程论文, 学年作业[英]课堂小测验currying work修整间修整加脂操作[皮革]cut-and-try work试凑工作dial clock work计数器的钟表结构daily work每日作业day's work【航海】周日航行定位工作day-wage work计日工作defective works不合格品deformation work变形功delivery work输出功desilting works沉沙工程desk work科室工作development work试制工作, 研究工作die work模压工作模锻冲压(工序)diploma work毕业论文dirty work脏活, 苦活; 卑鄙的勾当; 欺骗行为display work【刷】标题字排版dock work码头工作donkey work单调乏味的工作; 重活drainage works排水工程draw works绞车drawing work拉延工艺dress work整修工作dressing works选矿厂drove work【建】宽凿工duplicate work大量生产, 互换零件复制dust alleviation work减尘工作earth work土工作业, 土方工程earth and stone work土石方工程edge work磨边(平板玻璃边的加工)educational work教育著作; 教育工作effective work有效劳动, 有效工作electric work电气工程electric metallurgical works电气冶炼厂emergency work急救工作, 应急工程engine works发动机厂engineering works机器制造厂engineering repair works维修工厂enquiry based work调查研究工作erecting work安装工作erection work安装工作expansion work膨胀功experimental design work实验设计exploratory work探索性研究external work外功extra hour work加班extracurricular work课外活动课外作业eyelet work打孔眼, 冲孔face work车端面涂面工作false work工作架, 脚手架fancy work装饰性的编织品[刺绣]fascine work束柴作业failure-free work无故障工作fiber conduit work硬纸导管布线工程fiduciary work信托业务field work田野工作, 调查工作filigree work金(银、铜)丝装饰工艺financial work财政金融fine work精细工作fine-limit work精密工作finished work已加工工件finishing work修整厂fitter's work装配工作, 钳工工作flow work流动功follow-up work监视工作forge work锻工, 锻造formal group work分组作业foundry work铸造工作, 翻砂工作frame work构架, 框架fret work浮雕细工friction work摩擦功full size copying work按原尺寸复制gained work盈功gas works煤气厂gas detection work毒气侦查勤务glass works玻璃工厂glue works制胶厂(车间)grading work平土工作, 级配工作; 定纵断面工作, 拉坡工作graduation field work毕业实习ga(u)ge work样板工作glass work玻璃制造(业)good works【宗】善行graphic work图表作业grinding work磨工工作ground work基础, 地基根据原理group work小组作业group project work小组设计工作hack work苦力, 苦工half-sheet work【刷】双联本印刷hammered work锻造工作hand work手工harness work支架传动装置的木结构head work拱顶石饰, 头形装饰handling work运搬工作health work医疗保健工作high-volume work大部头著作, 巨著horse work吃力又枯燥的工作hot work高温作业hot-cold 中温加工(临界温度下的加工)hot-line work带电操作, 带电作业ice work冰上作业idle work无功, 虚功independent work独立作业自动作业indicated work指示功individual work个别作业industrial water works工业用水水厂[工程]injection work喷射功inlaid work镶嵌细工inlayed work镶嵌木工insulation work保温, 绝热insulator work绝缘子安装工程installation work安装工作; 布线工作; 布置工作integrated works联合企业intellectual work智力(脑力)劳动, 脑力工作internal work内功iron work铁工厂; 炼铁厂isentropic work等熵功isothemal works等温机件japanning works油漆工厂jelly work胶冻软糖, 水晶软糖jobbing work单件小批生产, 合同生产job work包工; 散工; 杂项的印刷工作joggle work啮合扣接榫作业journey work雇佣性工作, 散工, 短工laboratory work实验室作业lacquer work漆细工lap work搭接lathe work车工工作layout work设计设计图案划线工lead covered wiring work铅包线配线工程lexicographic work词汇作业line work线性操作Liturgical works宗教祈祷书live line work带电工作locomotive works机车厂long-and-short work长短砌合loss work亏功lost work无效功, 虚功lumped work滑轮工作组lump work总包工laying work敷设工程machine work机械加工, 切削加工机械制品machine works机械厂maintenance work维修工作main work主业(编订经营方案的业务分为前业与主业)making cost control work计算成本控制工作management accounting office work会计事务管理mandrel work最后加工工作整理工作maiden work处女作manufacturing works制造工厂maximum work最大功最多工作mechanical work机械功mesh work网状物metal lattice work金属格构metal structure works金属结构厂metal work work金工metallurgical works金属冶炼厂methodological work教学方法研究工作mighty work奇迹mill work (=fixtures)构件加工建筑细木工产品装配件mill works磨坊milling work铣工工作minimum work最小功mirror-deposit work镜面镀银加工miscellaneous work杂文集, 综合性著作moon work月相机构motion work走针机构, 走针轮系日历机构, 辅助齿轮组(保证时针分针正确的相对动作)传动机构, 传动系multicolor work多色印刷multioutlet metal tube work多引线金属管敷设工程muscular work肌肉活动negative work负功net work纯功no-load work空载运行, 无载功odd-shaped work畸形工件office work室内工作, 内业operational work操作oral work口头创作ordnance works兵工厂ore smelting works矿石冶炼厂osmotic work渗透功outdoor work户外工作, 露天作业overtime work超时工作, 加班工作paddle work划水板练习palette knife work(油画)厚涂法pan work糖球, 糖果制品, 包糖衣的糖果paper work日常文书工作patrol work巡道工作petrochemical works石油化工厂physical work体力劳动piece work计件工作pipe work管道工程plain-frame work平面构架plane frame work平桁架planer work刨工工作planing work刨工工作planning work计划工作plate work板金工加工plate for fixing work固定工件夹板plated work添纱针织物, 添纱组poker work烙画; 焦笔画political work政治课popular "mass" work群众活动practical work实习作业practical work in agriculture农场实习precision work精加工preliminary works准备工程preparation work准备工作pressed work压力加工priced work按件计价的工作principal work主业print works印花工厂production work生产工作programmed temperature works程序升温机件programming repair work计划修理工程project work设计工作, 设计作业public works建筑工程, 公共工程publishing work出版工作pump work泵站public pollution control work公害防治工作public works市政工程punchwork冲孔工作quantitativework定量操作rackwork[5rAk7wE:k]齿条机构, 齿条加工rag work砌石板rail-laying work铺轨工作railway tunnel work铁路隧道工程

写作思路：在选择材料前，必须要明确文章的体裁及文章所要表达的中心思想。要选取典型材料，即那些反映事物本质，有代表性、有说服力的材料。同时，还应注意材料的真实性和可信性。立意要深刻，创意要新颖。

正文：

同学们，你们注意到了吗？不知从何时起，学历成了求学者的毕生追求，成了他们成功的“不二法门”，学历也成为各大公司甄选人才防伪标志，一切任用与提升，都变得唯“历”是图。人们的命运都系于这一纸文凭，好像有了学历，手中就有了撼动山河的力量。

可现实生活中又有多少人本凭借过人履历被纳入巨头公司，又因不会使用打字机，不懂与人相处等小问题而被驱逐？若徒有那一纸文凭而无一技之长又何谈实干兴邦？又何谈以梦为马，不负韶华？由此观之，学历只是前行路上的垫脚石，助你腾跃；技能，才是坚实的铺路石，为你铺就人生坦途。

在这条路上，金融博士朱骏走的勇敢而又坚定。他先后在银行，科技公司工作，感叹于牙齿矫正技术的神奇，博士毕业六年的他重返专科学院潜心学医。他说，学历并不重要，真正重要的是提升自我实力，用更多的技能武装自己，更好地适应当今社会对复合型人才的需求。

他的勇敢令我们肃然起敬，他的前瞻性更值得我们称赞。他跳脱了“学历至上”的窠臼，转身以学习者的身份迈向新的征程，迎接新的人生。这既是努力实现个人价值，正确渠道，又是积极响应国家对技能型人才，对工匠精神号召的最美姿态。

面对未知的前方，有人选择了高考这座独木桥，有人选择了艺考这条羊肠小道，更有人顺应时代需求手握技能的刀剑，斩断迷惘与幻想，在时代的海洋里乘风破浪，犹记得2017年，一山东学生以及优秀的折纸技术，被哈工大降60分录取；又想起23岁姑娘聂凤凭理发手艺，在世界技能大赛崭露头角，直升副教授，享受国务院津贴；今又见焊接项目冠军宁显海凭借一技之长，改写命运……一幕幕，无不彰显技能于我们的重要意义。

更可喜的是我们的国家出台了政策，提出要大力发展职业教育，培育技术型人才来弥补我国高端技术人才缺口；又颁布了条令提高工人待遇，来扩充技能性大钧。有国策如此，强加在职业教育上的枷锁，也该松绑了。

同学们，趁现在时代正好，机遇正巧，让我们心怀梦想，手握犁铧，在时代沃土耕耘，在山高水远处迎来繁华。

药学毕业论文开题报告篇3 题 目 名 称： 番泻叶对小鼠尿量的影响 研究现状： 一、普鲁兰酶 普鲁兰酶(Pullulanase，. 2. 1. 41)是一种能够专一性切开支链淀粉分支点中的α糖苷键，从而剪下整个侧枝，形成直链淀粉的脱支酶。普鲁兰酶还可以分解普鲁兰多糖，普鲁兰酶来源于微生物，R-酶则来源于植物。普鲁兰酶最初是由Bender和Wallenfels于1961年通过产气气杆菌Aerobacter. aerogenes}(典型菌为肺炎克雷伯氏杆)发酵获得，他们报道了该酶良好的酶学性能。之后，各国的科研人员经过广泛深入研究，从不同的地区、微生物中获得该酶，掀起了开发普鲁兰酶的高潮。 在淀粉加工工业中，α淀粉酶最为常用，它的功能是水解淀粉的α-1,4糖苷键，单独用它时，产物中含有大量分支结构的糊精，其中就含有大量的α-1,6糖苷键。假如不把淀粉的α-1,6糖苷键彻底分解的话，势必会造成很大的浪费。自然界中，存在有能分解淀粉的α-1,6糖苷键的酶，通称为解支酶。如寡α-1,6葡萄糖苷酶( , Oligo-l,6-glucosidase )，普鲁兰酶( )，异淀粉酶( , Isoamylose )，支链淀粉一6-葡聚糖酶( )，其中普鲁兰酶要求的底物分子结构最小，故而可以将最小单位的支链分解，导致可以最大限度的利用淀粉，所以在淀粉加工工业中有着重要的用途和良好的市场前景。故而许多国家都争相开发，但是到现在为止，只有丹麦的NOVO公司具有普鲁兰酶的生产能力。我国只有向其进口，但是其价格昂贵，限制了普鲁兰酶在我国的应用。其实，我国早在七十年代就开发普鲁兰酶的产生菌，但是该菌的酶学性质不适合生产，至今我国在普鲁兰酶的国产化方面还没有报道。 在淀粉的加工行业上，对普鲁兰酶的酶学性质的要求是耐酸耐热，其原因是因为通常使用外加酶化法，由于所用酶类的限制，普鲁兰酶的添加可以在两步反应的任何一步，但必须满足上述的反应的条件。因此所开发的普鲁兰酶的酶学性质必须满足现有的酶法水解制糖的条件，也就是耐酸耐热。 二、普鲁兰酶的研究现状 1.产普鲁兰酶的微生物 普鲁兰酶最初是由Bender和Wallenfels于1961年通过产气杆菌(Aerobacter aerogenes)发酵获得。他们报道了该酶的良好性能之后，各国的科研人员经过广泛深入的研究，从不同的地区的微生物中获得该酶，掀起了开发普鲁兰酶的高潮。但是迄今为止，尽管发现许多微生物能够产普鲁兰酶，但是由于当今工业生产条件(酸性，温度)，大多数微生物所产的普鲁兰酶并无商业价值。以下便介绍一下普鲁兰酶的生产菌种。 蜡状芽抱杆菌覃状变种(Bacillus cereus ) 由日本的ToshiyukiTakasaki于1975年发现。该菌同时产生两种淀粉酶:β-淀粉酶和普鲁兰酶。最佳作用条件为pH6～，温度50℃，最大转化率(淀粉水解产生麦芽糖)大约为95%.酶学研究中发现，此酶在pH5，温度60℃依然保持大部分活性，该菌的营养细胞呈棒杆状，聚集成长短不等紊乱链状，无运动性，格兰氏阳性，产芽抱时细胞无明显膨胀。该菌最适生长温度30℃～37℃ ,最高生长温度在41℃～45℃，可以利用葡萄糖，甘露糖，麦芽糖，海藻糖，淀粉和糖原。 嗜酸性分解普鲁兰多糖芽抱杆菌() 上世纪八十年代初，丹麦Novo公司获得此菌，此菌所生产的普鲁兰酶耐热 (60℃)，耐酸()。该公司经过投入巨资开发研究，1983年Nov。公司在日本和欧洲市场同时商业化销售，商品名Prornozyme。如今，它是应用最广，产量最大的普鲁兰酶。呈棒状，深层发酵几小时后，可观察到类原生质体的膨胀细胞，较稳定，饱子呈圆柱体或椭圆体。格兰氏反应阳性，37℃生长良好，45℃以上和pI-1高于以上不长，在以普鲁兰糖为碳源的培养基(( ～)上生长良好。 枯草芽饱杆菌(Bacillus subtilis) 1986年，日本的Yushiyuki Takasaki报道了一株能产生耐热耐酸普鲁兰酶的菌种，被命名为Bacillus subtilis TU。此菌种所产生的酶为普鲁兰酶和淀粉酶的混合物，可水解淀粉为麦芽三糖和麦芽搪.水解普鲁兰糖为麦芽三糖，其中普鲁兰酶最佳作用pH为～，但在时亦有约50%的酶活，此普鲁兰酶最佳作用温度60℃。 耐热产硫梭菌(Clostridum Themosulfurogenes) 1987年.德国的等报道了一株能同时产a淀粉酶、普鲁兰酶和葡萄糖淀粉酶的菌种:耐热产硫梭菌。该菌种所产普鲁兰酶有较广的温度适应范围(40℃～85℃)，在～有较高的活性，在如此广的范围内都有较强活力无疑将扩大该普鲁兰酶的应用领域. Bacillusnaganoensis,Bacillus deramificans, 上世纪九十年代，Deweer发现了普鲁兰酶产生菌Bacillus naganoensis;Tomimura筛选出Bacillus deramifrcans。这两株菌所产的普鲁兰酶的酶学性质与Bacillus. Acidopullulyticus的酶学性质相似。这两株菌都是中度嗜酸菌，在以上就不生长，温度超过45℃以上同样也不生长。这两株普鲁兰酶产生菌的发现，进一步拓宽了普鲁兰酶的应用。 产普鲁兰酶的高温菌菌种 自上世纪八十年代以来，人们逐渐意识到在通常的自然条件下，很难筛选得到极端耐热的普鲁兰酶生产菌种，于是各国的科学家便把目光转移到温泉嗜高温细菌的筛选，而且现在已经取得较多的成果。Bacillus如vorcaldarius所产普鲁兰酶的最适温度和pH分别是75～85℃, , Thermotoga maritime的最适温度和pH分别是90℃, , Thermurs caldopHilus的最适温度和pH分别是75℃,, Fenidobacterion pernnavoran最适温度和pH分别是80～85℃, 2.普鲁兰酶的分子结构 至今为止，许多普鲁兰酶的基因己经被克隆，但是还没有见到任何有关普鲁兰酶结构的报道，但是在根据序列相似性对糖普键水解酶的分类，普鲁兰酶属于第13家族，α淀粉酶家族，这个家族中包含了30多种酶，可以分为水解酶，转移酶。异构酶三大类。这些酶能够水解和合成α～,α～,α～,α～,α～,α～糖苷键。其中很多酶的结构已经被报道，它们都采取了(β/α)8的结构，通过生物信息学的研究，这个家族的蛋白都有一个共同的结构，酶的活性中心都是(β/α)8折叠筒的结构，命名为结构域A。第13家族的大多数酶还具有结构域B，它是位于(β/α)8折叠筒中，第三个β片层与第三个α螺旋之间的一段序列，其特点是结构和长度差异较大，推测其功能是与底物的结合有关。在紧接着(β/α)8折叠筒后，还有C结构域，紧接C结构域，部分家族成员还有结构域D。 3.普鲁兰酶的应用 普鲁兰酶，在食品工业中是一种用途广泛的酶制剂和加工助剂。它能专一性分解淀粉中的支链淀粉和糖原分子及其衍生的低聚糖分支中的α～l, 6糖苷键，使分支结构断裂，形成长短不一的直链淀粉。因此，将该酶与 其它 淀粉酶配合使用时，可使淀粉糖化完全。近年来，普鲁兰酶己作为淀粉酶类中的一个新酶种，应用于淀粉为原料的食品等工业部门，在食品工业中有如下几方面的作用: 单独使用普鲁兰酶，使支链淀粉变为直链淀粉 直链淀粉具有凝结成块，易形成结构稳定的凝胶的特性，因此，可作为强韧的食品包装薄膜。这种薄膜对氧和油脂有良好的隔绝性，又因涂布开展性好，故适合于作为食品的保护层。它还适合于淀粉软糖制造，也可用作果酱增稠剂，用于装油脂含量高的食品，以防止油的渗出以及肉食品加工。近年来在食品工业中提倡使用可被生物降解的薄膜，直链淀粉在这些方面具有较大的发展前途。豆类直链淀粉含量较高，因此绿豆淀粉制成的粉丝韧性比其它淀粉好，如果用普鲁兰酶处理谷物淀粉，再制成直链淀粉后，可以制成高质量的粉丝。一般谷物淀粉中，直链淀粉含量仅占20%，支链淀粉含量约为80%。工业上每生产1吨直链淀粉就有4吨副产品的支链淀粉。美国虽然通过遗传育种的方法.得到含直链淀粉60%玉米新品种，但不大适于大量生产。国外已采用普鲁兰酶改变淀粉结构，可使支链淀粉变为直链淀粉。据报道，采用此法收率可达100%.制造直链淀粉的方法为，先采用普鲁兰酶分解经液化的分支部分，使其转变为直链淀粉，并以丁醇或缓慢冷却法沉淀淀粉。再回收含少量水分的晶型沉淀物，最后通过低温喷雾干燥法制成粉状的直链淀粉。 普鲁兰酶与β～淀粉酶配合使用生产麦芽搪 饴糖是我国传统的淀粉糖产品，其中所含部分麦芽糖，广泛用于糖果、糕点等食品工业。目前生产方法是以α～淀粉酶进行液化，再用β～淀粉酶水解支链淀粉，这样只能水解侧链部分。接近交叉地位的α～糖苷键时，水解反应停止。但如果使用普鲁兰酶共同水解，便能使分支断裂，提高淀粉酶水解程度，降低了β极限糊精的含量，大大提高了麦芽糖的产率，有利于生产麦芽搪浆。目前对加普鲁兰酶进行糖化己作了较大规模的试验。 试验条件为。每批投料量约为900公斤碎米，粉浆浓度为15～16Be°数皮用量(对碎米计)，β～淀粉酶活性2,000单位/克以上，;普鲁兰酶活性45,000～55,0 00单位/克，系由产气气杆菌生产，每批用量为1公斤。试验结果表明，加入普鲁兰酶糖化的试验糖与对照糖品相比，还原糖平均增加，麦芽糖含量平均增加了，糊精含量平均减少了高浓度麦芽糖浆较之高浓度葡萄搪浆，具有不易结晶，吸湿性小的特点，所以高浓度麦芽糖浆在食品工业中有着广泛的用途。采用普鲁兰酶与p一淀粉酶配合使用，成本低廉，麦芽糖收率达到70%左右，其至更高。 用于啤酒外加酶法糖化 啤酒生产中麦芽，既是酿造啤酒的主要原料，也为酿造过程提供了丰富的酶源。在啤酒酿造的糖化过程中，麦芽中分解淀粉的主要酶是α～淀粉酶、β～淀粉酶和分解淀粉α～1. 6糖瞥键的R一酶(植物普鲁兰酶或植物茁霉多糖酶)。β～淀粉酶与另两种淀粉酶协同作用，可使淀粉分解成麦芽糖(也包括少量的麦芽三糖和极少量的葡萄糖)和低分子糊精。使麦芽汁有比较理想的糖类组成。在工业生产中为了节约麦芽用量，采用所谓外加酶法糖化，即在减少麦芽用量的前提下，增加淀粉质辅助原料的比率，并加入适当种类的酶制剂进行搪化。要使大麦及其它辅助原料糖化完全，需要外加a一淀粉酶和分解α～糖苷键的普鲁兰酶制剂等。单独使用a一淀粉酶时产生麦芽糖和麦芽三搪是很不完全的。假如分解淀粉α～糖苷键的酶活性不足，淀粉分解就不完全，其结果是可发酵性糖含量低，制成的啤酒发酵度达不到要求。若采用能分解α～和α～糖苷键的糖化型淀粉酶，则其反应产物为葡萄糖，容易使酒味淡薄。采用普鲁兰酶与α～淀粉酶协同，效果良好，其分解产物主要是麦芽糖和少量的麦芽多糖。采用外加酶法糖化时，加入酶制剂的用量为:淀粉酶6～7单位/克大麦及大米:蛋白酶，60-80单位/克，并配合以菠萝蛋白酶10ppm，普鲁兰酶50单位/克大麦。以上三种酶制剂均添加于糖化或酒化开始。 总之，普鲁兰酶无论作为酶制剂和食品工业的加工助剂均有广阔的发展前途。 研究目的和意义： 酶制剂工业是上世纪七十年代就己经形成的一个重要的产业，目前世界酶制剂总产值达100亿美元，我国的产值约为100亿人民币，并且随着其应用领域的不断扩大以及新酶种的开发，这一市场正在迅猛发展。但是全球酶制剂产业几乎被几家外国公司所垄断，其中丹麦的NOVO公司几乎占全球总销售额的一半。本研究对普鲁兰酶的开发，对酶制剂产业的发展有重要的意义。 其次我国自从七十年代开始便对普鲁兰酶进行研究开发，但是所开发得到的普鲁兰酶，既不耐热也不耐酸，这就使其在工业化应用中受到了局限。为了改变我国对进口产品的依赖，填补我国这一领域的空白，寻找一条国产化的道路，本研究的目的是利用自然微生物资源，普鲁兰酶，提高我国淀粉原料的利用率，从而提高整个淀粉加工行业的生产率，这对我国淀粉加工产业的意义是不言而喻的。 研究内容(内容、结构框架以及重点、难点)： 一.普鲁兰酶产生菌的筛选 (1)样品的采集; (2)菌种初筛; (3)菌种复筛; (4)菌种保藏方法; (5)酶活力测定方法的建立。 二.产普鲁兰酶菌株的产酶条件的研究 (1)碳源，氮源对发酵产酶的影响; (2)初始PH对发酵产酶的影响; (3)接种量对发酵产酶的影响; (4)发酵温度对产酶的影响; (5)金属离子对产酶的影响。 重点或关键技术： (1)纯菌株的分离; (2)菌株的鉴定方法的选择。 研究方法、手段： 一.普鲁兰酶产生菌的筛选 (1)样品的采集：选择适合产生的地点(面粉厂.菜地.果园等)采集土样 (2)菌种初筛：在采集的土样用无菌水稀释后，在含有淀粉类的培养基中做平板涂步， 37℃培养48h后，用碘液进行显色反应，将有淀粉酶产生的菌落接于斜面中保存。 (3)菌种复筛：将前期分离的能产生淀粉酶的菌株涂步于普鲁兰糖平板上，37℃培养48h后用95%乙醇进行透明圈实验。有透明圈产生说明菌株产生普鲁兰酶，将产生透明圈的菌落挑于斜面培养基培养。 (4)菌种保藏方法： 采用4℃低温保藏。 (5)酶活力测定方法的建立：采用发酵培养液经过离心后利用DNS显色法 520nm测定吸光值，测定标准葡萄糖标准曲线，利用标准曲线计算普鲁兰酶酶活大小。 二.产普鲁兰酶菌株的产酶条件的研究 (1)碳源，氮源对发酵产酶的影响：采用不同碳源，氮源培养基培养一段时间，测定酶活力。(其他条件相同：接种量，装瓶量，初始PH值，转速，培养时间。) (2)初始PH对发酵产酶的影响：采用相同发酵培养基，在不同初始PH下接种等量种子液。在相同条件下培养，测定发酵液的酶活。(其他条件相同：接种量，装瓶量，转速，最佳培养温度，最佳培养时间。) (3)接种量对发酵产酶的影响：在发酵培养基中分别接入2%，4%，6%，8%， 10%，14%，18%的种子培养液于最佳碳源，氮源，最佳初始PH的培养基中，在相同条件下培养，分别检测酶活。(采用以上确定的最佳碳源，氮源，最佳初始PH。) (4)发酵温度对产酶的影响：采用相同培养基，在不同温度下(25℃，30℃，35℃，40℃，45℃)培养一定时间，测定酶活力。 (5)金属离子对产酶的影响：在基础培养基中加入少量不同金属离子，发酵后测酶活。(金属离子有： 锰离子，钙离子，锌离子，镁离子，铁离子，铜离子。) 研究进度 ：完成项目总体进度30%，样品土样的采集及前期的准备工作,菌株的初筛，包括(样品土样原液的涂步培养及摇床培养，产支链淀粉酶菌株的挑选及斜面培养)。 ：完成项目总体进度50%,菌株的复筛，包括(产普鲁兰酶菌株的筛选及斜面培养),葡萄糖标准曲线的测定,酶活测定方法的建立,并以酶活大小对菌株进行再次筛选。 ：完成项目总体进度80%,产酶条件的研究。包括：碳源，氮源，初始PH值，接种量，发酵温度，金属离子。并通过各中单因素试验确定发酵培养基的最佳碳源，氮源，初始PH值，接种量，发酵温度，金属离子。 2009、4—2009、5 ：完成项目总体进度100%,课题总结，撰写论文。 文献综述(包括：国内外研究理论、研究方法、进展情况、存在问题、参考依据等) 自从1961年Bender H.等人在研究一株产气气杆菌Aerobacter aerogenes(典型菌为肺炎克雷伯氏杆菌)时首次发现普鲁兰酶后，国际上对产生这种酶的微生物进行了广泛研究，发现许多微生物可以产生此酶，并筛选出一些适用于工业化生产的优良菌株。随着该酶的应用发展，对耐热性普鲁兰酶的研究也逐渐增多，已成功克隆并表达了该酶的基因。国内1976年开始对一株产气气杆菌(Aerobacteraerogenes 10016)的普鲁兰酶进行研究，对该菌株的产酶条件、酶的分离提取及酶学性质作了报道，并研究了该酶的食品级提取技术。此外，陈朝银、刘涛等人从云南温泉水样中筛选到一株产普鲁兰酶高温栖热菌菌株，通过诱导等实验将该酶的酶活从提高到170u/mL，酶产量提高了近2500倍左右，酶的最适作用温度及pH分别是75℃和，具有一定的耐热和耐酸特性。 陈金全等从温泉水样中筛选到一株产耐热耐酸普鲁兰酶的野生菌株，并根据形态、生理生化特征、细胞化学组分分析及16SrDNA序列比对、基因组DNA的G+C摩尔百分含量、同源性比对等实验，鉴定其为脂环酸芽抱杆菌属(Alicyclobacillus)的一个新种，所产酶最适作用温度为60℃，最适pH值，具有较好的耐热耐酸特性。杨云娟等利用毕赤酵母成功构建了普鲁兰酶表达量较高的基因工程菌，摇瓶发酵酶活可达，最佳发酵条件下产量可达 .酶的最适作用温度为600C，最适pH值，具有较好的耐热耐酸性。目前我国仍没有具备独立生产普鲁兰酶能力的厂商，要实现低成本、国产化的生产，还有很长的路要走。 技术应用于耐热脱支酶的研究，使耐热异淀粉酶的研究有了很大发展。Coleman等人将嗜热厌氧菌T. brockii普鲁兰酶基因克隆到中得到的克隆子分泌的普鲁兰酶数量高于出发菌株，Okada等人将Bacillus Steanther, onhiu:中编码热稳定异淀粉酶的基因克隆到:中，得到的转化菌株其异淀粉酶能在60 ℃稳定15分钟。Burchadf将。ostridium thermosulf urogenes DSM38%的嗜热异淀粉酶基因克隆并在中表达，所得酶的最适pH和最适温度与出发菌相同，而且在高温下仍能保持活性.Antranikiam等人将Pyrococcus舟riousous的异淀粉酶基因克隆到中并分离得到了酶蛋白。尽管如此，目前尚未有已将转基因的耐热性异淀粉酶工程菌应用到工业生产中的报道。众所周知，利用物理和化学诱变剂单独或复合处理微生物细胞是选育高产变种菌株行之有效的经典方法，它在为培育多种抗生素、氨基酸、核苷酸激酶(尤其是蛋白酶和淀粉酶)的高产变种菌株方面曾经起过极为重要的作用，至今仍然是方便易行和行之有效的方法之一。 主要参考文献： [1][美]惠斯特勒等编王雏文等译.淀粉的化学与工艺学[M].北京：中国食品出版社，1988 [2]张树政.酶制剂工业[M]. 北京: 科学出版社，1998 [3]邬显章.酶的工业生产技术[M]. 吉林: 吉林科学技术出版社，1988 [4]Taniguchi H, Sakano Y, Ohnishi M, Okada G(1985) Pullulanase[J].TanpakushitsuKakusan Koso. 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