火腿肠中亚硝酸盐的测定论文答辩

火腿肠中亚硝酸盐含量的测定试验方法如下：

一、测定原理

样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，产生重氮盐，此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料，染料的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，其最大吸收波长为538nm，测定其吸光度后，可与标准比较定量。

二、实训操作

1．仪器设备

小型绞肉机或组织捣碎机或研钵；可见分光光度计；天平(感量为0.1mg和lmg)；，50ml烧杯；500ml容量瓶；小玻棒；比色管；比色架。

2．试剂

①亚铁氰化钾溶液(106g／L)：称取106.Og亚铁氰化钾用水溶解，并稀释至1000ml。

②乙酸锌溶液(220g／L)：称取220.0g乙酸锌，先加30ml冰醋酸溶解，用水稀释至1000ml。

③饱和硼砂溶液(50g／L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100ml热水中，冷却后备用。

④氨缓冲溶液(pH9.6—9.7)：量取30ml盐酸，加100ml水，混匀后加65ml氨水，再加水稀释至1000ml，混匀。调节pH至9.6～9.7。

⑤缓冲液的稀释液：量取50ml氨缓冲溶液，加水稀释至500ml混匀。

⑥盐酸(0.1mol／L)：量取5ml盐酸，用水稀释至600ml。

⑦对氨基苯磺酸溶液(4g／L)：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100ml 20％(v／v)盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

⑧盐酸萘乙二胺溶液(2g／L)：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100ml水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

⑨亚硝酸钠标准溶液(200µg/mL)：准确称取0.1000g于1lO～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

⑩亚硝酸钠标准使用液(5.0µg／mL)：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml，置于200ml容量瓶中，加水稀释至刻度。

3．样品预处理

(1)提取 火腿肠一捣碎_取匀样0.5g一50ml。烧杯一加入饱和硼砂液12.5ml。—搅拌均匀一用约70℃的水大约300ml。将试样洗入500mL容量瓶一沸水浴加热15min一冷水冷却至室温。

(2)提取液净化 上述提取液→加亚铁氰化钾和乙酸锌各5mL→定容→放置0.5h→撇去脂肪层→过滤(弃去不溶物)→弃去初滤液约30mL→滤液待测。

4．成分分析

(1)标准曲线绘制 取10个50mL比色管一比色架一吸取40mL样品处理液至其中一个50mL比色管中一另吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、2．50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、4、5、7．5、10、12µg亚硝酸钠)一分别置于其余的比色管中→在所有的比色管中分别加入2mL 0.4％对氨基苯磺酸溶液混

匀→静置3-5min→于各管中加入lmL 0.2％盐酸萘乙二胺溶液→加水至刻度→混匀-静置15min→用2cm比色杯，以零管调节零点→于波长538nm处测吸光度A→绘制标准曲线一同时做试剂空白。

(2)样品测定选择合适的稀释倍数→吸取40mL上述滤液于50mL容量瓶中→按绘制标准曲线的步骤测量在波长为538nm下进行测定A一记录→从标准曲线查出稀释样品中的亚硝酸钠的量。