张玉梅先后于1993年取得法律顾问资格，1994年取得律师资格。在负责碑林分局复议诉讼的工作岗位上，打赢了百余场官司，仅在近几年当中，就为分局处理陈年诉讼积案80余件，涉案金额4000多万元，案件全部胜诉，仅律师代理费一项就为分局节省了上百万元。还负责分局行政处罚案件的同级核审工作，数年来，核审的案件数以千记，没有出现一起错案，也无一引起复议和诉讼。她负责的法制科，连续14年被评为西安市局系统法制工作先进集体，还被国家总局确定为基层法制工作和基层调研联系点。张玉梅在国家和省、市级刊物上发表文章70余篇，约50万字，多篇文章被选送到国家工商总局参加专题研讨，得到较高赞誉。她还写出了4万多字的《为了明天.诉讼案例集》一书，对行政执法起到了很好的借签和警示的作用，倍受各方的关注和赞赏。分局承担国家工商总局的“工商执法中的自由裁量权”的调研课题，她带领课题组的同志齐心协力，高质量地完成了任务，受到了国家总局的好评。她忘我工作，短短一个月中就4次晕倒在工作岗位上！在重病期间，她甚至不顾医生的忠告，要求用担架把自己抬到法庭上为分局代理诉讼！她代理的案件当中，绝大多数是历史遗留的民事纠纷，不属于她的工作职责，可她却无条件全部承担了下来。有些案件的当事人甚至威胁她，还有人给她许诺高额的报酬，为了集体的利益，她都是严词相拒。
先后在《山东大学学报》、《齐鲁学刊》、《山东社会科学》、《法学论坛》、《山东师范大学学报》、《黑龙江高教研究》等全国核心期刊和其他学术期刊上发表论文近30篇。其中代表性的成果有：《当代中国的法制认同：意义、内容及形成机制》，载《山东大学学报（哲社版）》2007年第5期（被《中国高校文科学术文摘》全文转载）获 2009年第二十三次山东省社会科学优秀成果三等奖；《儒家道德思想在大学生价值观建构中的现代价值》，载《黑龙江高教研究》2007年第10期，获2008年山东省教育厅人文社会科学类三等奖；《孔子德政思想评析》，载《山东社会科学》2007年第7期，获2008年济宁学院社会科学优秀成果奖三等奖；《孔子民本思想的现代价值转换》，载《山东师范大学学报》2007年第3期；《公共政策的“内部输入”机制与当代中国的政治认同》，载《齐鲁学刊》2008年第2期；《“无讼”法律文化与中国公众的法律认同》，载《法学论坛》2007年第4期；《儒家人文精神度越现代人的异化困境之可能》载《山东师范大学学报》2009年第5期。另外，主持并完成济宁学院人文社会科学研究课题1项。参与完成山东省教育厅科研课题1项 。
邓炯
（河南省土地勘测规划院，郑州，450003）
摘要：为建立适合农用地定级估价实际需要的农用地定级估价信息系统，提高农用地定级估价工作效率和精度，形成统一的、完整的城乡土地地价体系，实现地价统一管理的科学化和信息化，运用综合分析法，设计并应用农用地估价信息系统。
关键词：农用地；定级估价；信息系统；设计；应用
相对城镇土地定级估价而言，农用地定级估价是一项新生事物，涉及大量的空间数据和属性数据，对这些数据进行一系列的覆合叠加、空间分析和统计计算，如果依靠人工来做不仅烦琐而且容易出错，而依靠地理信息系统（GIS）建立农用地定级估价信息系统来开展农用地定级估价工作则可大大提高数据处理的速度和精度，在计算机技术已广泛应用的今天，无疑这是一种科学、快捷的方法。根据国土资源部2003年发布的《农用地定级规程》、《农用地估价规程》，结合作者在农用地定级估价实际工作中遇到的一些问题，对农用地定级估价信息系统的设计提出一些设想，并对利用农用地定级估价信息系统进行农用地定级估价进行简要说明，以利于农用地定级估价工作的开展。
1 农用地定级估价信息系统
农用地定级估价信息系统是地理信息系统的应用子系统，它利用的是地理信息系统的理论和技术方法，以计算机分析、制图为核心，实现农用地定级估价相关因素因子调查表、统计表、样本图件信息的输入、储存与管理，自动计算出因素因子的作用分值，自动进行级别划分，显示和绘制各类因素、因子作用分值的相关图件，经过对样本点进行筛选与测算，最终输出农用地级别及基准地价图。
1.1 农用地定级估价信息系统的设计原则
1.1.1 技术创新与兼顾规程原则
农用地定级估价信息系统的设计应遵循农用地定级估价规程要求，又要充分利用当代高新技术，合理应用各种先进技术成果和相关理论方法，提高系统的开发技术水平和先进性。
1.1.2 面向对象原则
农用地定级估价工作需采用最新的土地利用现状图作为工作底图，该底图具有丰富的空间信息。应用于农用地定级估价中的各种图形信息更是复杂，采用面向对象技术，充分利用类的封装性、记录性、多态性进行模块设计将会大大地方便开发，并且增强应用程序的扩展性。
1.1.3 模块化设计原则
采用结构化和模块化相结合的方法，根据工作要求，自上而下对系统进行功能解析与模块划分。在调查用户需求的基础上明晰系统用户子模块，建立最底层次的“积木块”，然后通过连接形成面向应用的“上层模块”。
1.1.4 一致性原则
在系统设计和建设过程中，应以现有的技术规程为基础，力求标准化、规范化和统一化，阶段实施与整体规划相一致。另外农用地定级估价信息系统作为一个整体，在组织形式、界面风格、操作模式和数据接口以及系统变量的设置、模块的调用、模块间的相互关系等方面应具有一致性。
1.1.5 应用程序与数据分离原则
为了使系统具有良好的可移植性和可维护性，在系统的结构化组织中系统程序代码尽可能与图形数据库、属性数据库相分离。系统还应提供其他数据库的接口，便于各模块相对地独立运行或集成运行。
1.1.6 实用性和安全性原则
农用地定级估价信息系统的设计要“以人为本”，充分考虑国土资源管理部门农用地定级估价业务需要，贴近工作实际，使农用地定级估价信息系统功能强大、界面友好、操作简单、使用方便。另外，为保证系统运行成果数据的安全性，还应设计相应的数据备份等安全性措施和功能。
1.2 农用地定级估价信息系统的软硬件配置
系统运行的硬件环境是系统的物理基础，其配置的高低直接影响着系统运行的效率和好坏。但系统硬件配置受各种因素的影响和制约，如系统控制区域范围的大小、系统管理数据的多少、系统使用部门的经济承受能力等。为使农用地定级估价信息系统的性能有较好地发挥，农用地定级估价信息系统的硬件配置应采用PⅣ以上，具有光盘刻录功能计算机，外围设备应配备激光打印机、A0 幅面工程扫描仪，A0 幅面的彩色喷墨绘图仪等设备。
软件是系统运行的核心，没有软件的支持，再好的硬件设备也无法完成工作。农用地定级估价信息系统的软件一般来说操作系统采用通用的 Windows 系统，地理信息系统（GIS）软件以Mapinfo或MAPGIS等GIS软件为平台，关系数据库软件可以Foxpro等软件为主，在此基础上开发专门管理农用地定级估价数据的数据管理软件，可单独运行，不熟悉程序设计的农用地定级估价人员也能方便操作。
1.3 农用地定级估价信息系统的总体结构
系统包括基础数据处理子系统、土地定级子系统、基准地价评估子系统等。系统体系结构如下页图所示。
1.4 农用地定级估价信息系统的数据库结构
1.4.1 基础数据库
（1）工作底图空间数据库。
（2）离散点分布空间数据库。
（3）各类因素因子属性关系数据库。
1.4.2 过程数据库
（1）各类因素因子复合形成的空间数据库。
（2）各类因素因子分析形成的关系数据库。
农用地定级估价信息系统结构图
1.4.3 结果数据库
（1）用于各种报表输出的定级结果、面积统计数据库。
（2）用于绘制各种分值图、土地级别图、基准地价图等图形数据库。
1.5 农用地定级估价信息系统的功能
1.5.1 定级模块功能
（1）确定因素、因子权重。
（2）自动计算因子作分值。
（3）自动生成因素图。
（4）自动生成总分值图。
（5）自动划分土地级别。
（6）绘制土地级别图及各因素作用分等值线图。
（7）为用户提供交互式修正级别的界面。
1.5.2 估价模块功能
（1）收益样点的计算检验。
（2）样点地价的开发程度、期日等影响因素修正。
（3）异常样点剔除。
（4）确定级别基准地价。
（5）编制宗地地价修正体系。
1.5.3 数据处理模块功能
（1）生成ARC/INFO、MAPINFO、AUTOCAD等空间数据和XLS、DBF、MDB等属性数据。
（2）导入和导出点、线、面的图形和属性数据的编辑功能。
（3）图层数据的空间和条件查询。
（4）实现图层数据的属性统计。
2 农用地定级估价信息系统的应用
2.1 定级因素图形库建立和定级单元划分
通过扫描地图的矢量化、编辑、拓扑及属性库的维护，提供放大、缩小、漫游等基本窗口操作功能，建立分等因素空间和属性数据库。
定级单元是定级指数测算的基本空间单位，要求单元内土地质量相对均一、单元之间有较大差异。利用农用地定级估价信息系统采用叠置法或多边形法划分农用地定级单元时用到的就是GIS的空间多边形叠加分析功能。
2.2 农用地定级因素的分值计算和定级修正系数计算
根据《农用地定级规程》的要求，影响农用地级别的因素有自然、经济和社会等多种，但按其空间分布规律，可归纳为两种类型，一是扩散性递减因素，如土地区位因素等；二是区域均质性因素，如土地利用状况、耕作条件等。对于扩散性因素作用分值的计算，采用了GIS的空间缓冲区分析方法和技术。多种定级因素的综合影响程度的确定，即定级因素作用总分值的计算，采用了GIS的空间要素的叠加分析方法和技术。
土地定级因素修正系数的求算，可利用GIS，根据定级因素区域平均分值，自动计算各个定级因素、每一个定级单元的修正系数。
2.3 农用地定级指数的计算及级别划分
利用GIS将根据选定的定级因素，采用连乘或加权平均乘积的方法，将各修正系数叠加到分等指数图层上去，得到土地定级指数图层。
利用GIS系统对定级单元的定级指数进行统计分析，进而找出区分土地级别的指标界限，根据划分土地级别的指标界限对定级单元的定级指数进行分级，从而生成土地级别数据库。
2.4 样点及基准地价计算
利用GIS自动在土地级别数据库中提取地价样点所在的土地级别和定级指数，从行政区界数据库中提取行政区名称和代码；根据样点的用地类型或土地级别，对地价样点的收益项等内容，进行二倍方差检验，剔除不符合要求的异常样点，生成新的地价样点数据库。
根据新的地价样点数据库，采用收益还原法等方法，自动计算样点地价，进而求算各级别的基准地价。
2.5 统计分析、报表生成及图件编制
利用GIS的多维分析，可以完成分村、分乡镇、分地类的等别、级别面积统计分析，方便地进行分类汇总统计，也可以对指定村、指定乡镇和指定地类的级别面积统计分析，同时生成上述内容相应的图表和报表。
利用GIS的编辑和输出功能，可以实现农用地定级估价所有成果图件的数字化并按要求输出各类成果图件。
3 现有农用地定级估价信息系统存在的问题
经过十多年的发展，城镇土地定级估价信息系统得到了广泛的应用和实践，已基本成熟。而农用地定级估价信息系统是伴随着农用地定级估价而生的新事物，现有的一些农用地定级估价信息系统仍不十分完善，主要表现在：①一些农用地定级估价信息系统操作繁琐，由于基层国土资源管理部门工作人员计算机知识普遍缺乏，使用起来十分困难，不利于农用地定级估价更新工作的开展；②一些定级估价信息系统，需要手工输入大量的属性数据，甚至有的农用地定级估价信息系统不能自动识别样点所在级别，在地价计算时增加了很大的工作量；③还有一些定级估价信息系统图形编辑功能不强，需要另外的GIS软件进行农用地定级估价级别图及因素因子作用分值图的编辑修改。
要建立成熟可靠、适应农用地定级估价特点、操作流程贴近实际工作需要、面向基层国土资源管理部门工作人员的农地定级估价信息系统，使基层国土资源管理工作人员能依靠自身力量来进行农用地定级估价及更新工作的信息系统，逐步形成统一的、完整的城乡土地地价体系，从而实现地价统一管理的科学化和信息化，仍然需要认真的探索和研究。
参考文献
农用地定级规程［S］.国土资源部，2003
农用地估价规程［S］.国土资源部，2003
邬伦，刘瑜等.地理信息系统——原理、方法和应用［M］.北京：科学出版社，2001：195～196
邬伦，张晶，赵伟.地理信息系统［M］.北京：电子工业出版社，2002.（7）：128～135
陈述彭，鲁学军，周成虎.地理信息系统导论［M］.北京：科学出版社，1995，（5）：1～10
吴信才等.地理信息系统原理与方法［M］.北京：电子工业出版社，2002，（3）213～214
邓留献等.农用土地定级估价理论与实践［M］.北京：中国大地出版社，2000：103～106
张玉梅.基于 GIS 的开放式城镇土地定级信息系统的设计［A］.2005年中国土地学会学术年会论文集［C］.2005：162～167
描写思路：对于这种议论文，首先要写剖析事理，然后在论述事理，最后要发表意见，其范例为：
漫步在田间小道上，看到的并不是那么温和秀丽，而是各种不堪，我不由得皱起了眉头，如果是你，你会如何，如果你用一种丑的眼光去看，换来的可能也是丑，如果你用不同的眼光去赏，或许就是另一种风光了。
看到一朵鲜花旁边有一堆牛粪，你可能第一感觉就是臭，也许你并没有闻到，但是你的心缺位这花感到不值，真是一朵鲜花插到牛粪上了。
然而，“子非鱼焉知鱼之乐”花可不像你想的那样，牛粪是不堪入眼，可是换一种眼光去赏，你会发现牛粪为花提供了养料，也许这朵花正在暗喜呢，当这朵花开放时，你看到的可能是美丽、绚烂、高雅，闻到的是花独有的清香，可是你却没有看到那堆牛粪的各种不堪，闻到的永远也是臭，每个人都有自己独特的见解，当一些另类的景色在你的眼中是不堪，可是在别人眼中也许就是另一种美了。
不要以自己的眼光来判断事物的好或坏，那样你就只能自欺欺人了，和不妨换一种眼光去看，去思考他的独特，以美的眼光赏，你看的永远是那绽放的美。
先后在《山东大学学报》、《齐鲁学刊》、《山东社会科学》、《法学论坛》、《山东师范大学学报》、《黑龙江高教研究》等全国核心期刊和其他学术期刊上发表论文近30篇。其中代表性的成果有：《当代中国的法制认同：意义、内容及形成机制》，载《山东大学学报（哲社版）》2007年第5期（被《中国高校文科学术文摘》全文转载）获 2009年第二十三次山东省社会科学优秀成果三等奖；《儒家道德思想在大学生价值观建构中的现代价值》，载《黑龙江高教研究》2007年第10期，获2008年山东省教育厅人文社会科学类三等奖；《孔子德政思想评析》，载《山东社会科学》2007年第7期，获2008年济宁学院社会科学优秀成果奖三等奖；《孔子民本思想的现代价值转换》，载《山东师范大学学报》2007年第3期；《公共政策的“内部输入”机制与当代中国的政治认同》，载《齐鲁学刊》2008年第2期；《“无讼”法律文化与中国公众的法律认同》，载《法学论坛》2007年第4期；《儒家人文精神度越现代人的异化困境之可能》载《山东师范大学学报》2009年第5期。另外，主持并完成济宁学院人文社会科学研究课题1项。参与完成山东省教育厅科研课题1项 。
[1] ZHANG Y M, ET AL. POLYMER-PLASTICS TECHNOLOGY AND ENGINEERING, 2008, 47(7): 688-691[2] WU B, ZHANG Y M, ET AL. J. CHEM. ENG. DATA, 2008, 53: 983-985[3] WU B, ZHANG Y M, ET AL. J. PHYS. CHEM. B, 2008, 112: 6426-6429[4] ZHANG Y M, ET AL. POLYMER ENGINEERING AND SCIENCE, 2008, 48(1): 184-190[5] LIU W W, CHENG L Y, ZHANG H Y, ZHANG Y M, ET AL. INT. J. MOL. SCI,, 2007, 8, 180-188.[6] TU X P, ZHANG Y M, ET AL. JOURNAL OF MACROMOLECULAR SCIENCE, PART B: PHYSICS, 2006, 45, 665[7] LI D, ZHANG Y M, ET AL. JOURNAL OF APPLIED POLYMER SCIENCE. 2006, 102, 2199[8] LI D, ZHANG Y M, ET AL. JOURNAL OF APPLIED POLYMER SCIENCE. 2006, 102, 4254[9] ZHANG Y M, ET AL. MACROMOLECULAR SYMPOSIA. 2004, 216, 1[10] LIANG C, ZHANG Y M, ET AL. MACROMOLECULAR SYMPOSIA. 2004, 216, 9
[ 1 ] 崔玉敏. 小公司病. 黑龙江科学技术出版社, 2002. 01;[ 2 ] 刘志远. 候青川. 财务管理. 中国经济出版社, 2000. 01;[ 3 ] 袁建国. 财务管理. 东北财经大学出版社, 2001. 07;[ 4 ] 李海波. 财务管理. 高等教育出版社, 2000. 08;[ 5 ] 梁继先. 中小企业如何加强财务管理[ J ]濮阳职业技术学院报, 2005, ( 03);[ 6 ] 李冬梅. 中小财务管理存在的问题及对策[ J ]河北职业技术学院报, 2005, ( 04);[ 7 ] 张树森. 浅谈我国中小企业财务管理存在的问题于对策[ J ]山西青年管理干部学院报, 2008, ( 01);[ 8 ] 何学红. 中小企业财务管理的问题及对策[ J ]中国西部科技,2008, ( 10);[ 9 ] 王沛宁. 中小企业财务管理的问题及对策[ J ]甘肃亚盛集团,2008, ( 03);[ 10 ] 曹伟. 我国利润分配会计的几个问题研究[ J ]中国人民大学商学院, 2004, ( 02)
人发笑的艺术，其主要表现方式即是幽默。
而幽默的本质就是有趣、可笑和意味深长。幽默是人类智慧的结晶，是一种高级的情感活动和审美活动，任何平淡庸劣的价值取向和因循固陋的思维方式，都与幽默无缘。
现实生活中，我们常常可以看到，双方争论激 烈、剑拔弩张、僵持不下，往往由于第三者的一两句幽默的话语，即可使争执的双方哑 然失笑，撒手言 欢，化干戈为玉帛。而在一个死气沉沉、单调乏味的场合，也往住因为某个人的幽默谈 笑，打破了这种沉寂局面，活跃了人们疲惫麻木的神经，从而营造了一种生动活泼、健康风 趣的氛围。
所以，从某种意义上说，幽默是化解人类矛盾的调和剂，是活跃和丰富人类生活 的兴奋剂，是一种高雅的精神活动和绝美的行为方式。这里所选的六十八个幽默故事，从多个角度折射了中国古代社会特别是中世纪以来的社 会生活和人情世态。
这些笑话或虚幻，或质实，或揭示，或批判，或赞美，或讽刺，或嘲 谑，或解颐，千姿百态，多姿多彩，把人们带入一个古老而现实的迷人世界，从而获得精神 和情志的最大满足。偷肉 某甲去京城卖肉，在路旁一厕所前停下来解手，把肉挂在外面。
某乙见此，忙把肉偷 去。还没来得及走远，甲已经走出厕所，抓住乙，问乙是否看见有人从厕所旁拿走了他的 肉。
乙恐甲识破，早把肉衔在嘴里，不耐烦地说：“你真是个笨蛋！把肉挂在门外，哪能不 丢？如果像我这样，把肉衔在嘴里，岂有丢失之理？” ——魏·邯郸淳《笑林》姓名游戏 北齐的西阳王徐之才极有口才，尤善于文字游戏。在他未封王时，尝与尚书王元景戏 耍。
王元景嘲笑徐之才的名字，说：“你的名字叫‘之才’，这又有什么讲法？依我看来，叫‘乏才’还差不多。”徐之才听了，不恼不怒，立即嘲弄王元景的姓：“‘王’这个字，左边加上言为‘ㄍ摆俊保拷愠闪恕瘛由暇弊闶歉觥怼恚 出角、尾就变成‘羊’。”
王元景听了，张口结舌，尴尬万分。又有一次，徐之才宴请客人，卢元明也在座。
席间，卢元明戏弄徐之才的姓说：“‘徐’字也就是未入人（“未”字加上“彳”和“入”）。”徐之才当即嘲弄元明的姓— —“卢”（繁体为“卢”）字：“‘卢’这个字，安‘啊印稹悺 生男成‘虏’（虏）'，配‘马’（马）成‘驴’（驴）。”
直说得卢元明面红耳赤，无言 以对，满座人笑得前仰后合。——旧题隋·侯白《启颜录》燕窝与牛犊 侯白后来做了唐朝的官员，经常跟人们在一块猜谜语，侯白先对众人约法三章：“所猜 之物，一、必须是能看见的实物；二、不能虚作解释，迷惑众人；三、如果解释完了，却见 不到此物，就应受罚。”
接着他先出谜面：“背与屋一样大，肚与枕（车后横木）一样大，口与杯子一样大。”大家猜了半天，谁也没猜中，都说：“天下哪里有口和杯子一样大而背 却和屋一样大的物件？定无此物，你必须跟我们大家打个赌。”
侯白跟众人打完赌，解释 说：“这是燕子窝。”众人恍然大笑。
又有一次，侯白出席一个大型宴会。席间，大家都让他作个谜语助兴。
所猜之物，既不 能怪僻难识，又不能抽象不实。侯白应声而道：“有物大如狗，面貌极似牛。
这是何物？” 众人竞相猜个不停，有的说是獐子，有的说是鹿，但都被大家否定了。便让侯白说出谜底。
侯白哈哈大笑道：“这是个牛犊。” ——旧题隋·侯白《启颜录》贺知章乞名 唐玄宗天宝初年，文名颇著的秘书监贺知章，上书朝廷，欲告老致仕归故乡吴中。
玄宗 李隆基，对他非常敬重，诸事待遇异于众人。贺知章临行，与唐玄宗辞别，不由得老泪纵横。
唐玄宗问他还有什么要求。知章说：“臣知章有一犬子，尚未有定名，若陛下赐名，实老臣归乡之荣也。”
玄宗说：“信乃道之 核心，孚者，信也。卿之子宜名为孚。”
知章拜谢受命。时间长了，知章不觉大悟，自忖道：“皇上太取笑我啦。
我是吴地人，‘孚’字乃是 ‘爪’字下面加上‘子’字。他为我儿取名‘孚’，岂不是称我儿爪子吗？” ——宋·高怿《群居解颐》不知诗为何物 艾子喜欢作诗。
一天，艾子漫游到齐魏之间，下榻在一个旅馆。夜间，他听到邻屋里有 人说话：“一首。”
不一会儿又说：“又是一首。”艾子莫名其妙，困意全无，一夜无眠。
躺到拂晓，共听到邻屋那人大约说了六七次，亦即六七首也。艾子以为邻屋那人一定是个诗 人，在静静月夜里专心吟诗，心里油然产生敬意，又爱那人文思敏捷，便决定结识一下此人。
一大早，艾子就披衣下床，整好冠带，站在门口迎候。不一会儿，邻屋里走出一个商贩 模样的人来，身材瘦弱，一脸病相。
艾子感到很失望，心想：就凭这副尊容，哪像个诗人？也许，人不可貌相，不能盲目揣度。便走上前拜问道：“听说先生诗篇甚多，能否让学生我 看一下。”
那人说：“我是一个做生意的，从来不晓得诗是什么玩意儿。”始终拒绝拿出诗 来。
艾子固执地说：“昨天夜里听到您在屋里说‘一首’，不一会儿又说‘一首’，难道那 不是诗吗？” 那人听了，不觉哑然失笑：“您误会啦。昨夜我肚子不好，每泻一次，夜里找不到手 纸，于是就用手揩。
一夜腹泻不止，差不多污了六七次手。我说的‘手’，不是诗篇之 ‘首’。”
艾子听。
世说新语 谢太傅寒雪日内集，与儿女讲论文义。
俄而雪骤，公欣然曰：「白雪纷纷何所似？」兄子胡儿曰：「撒盐空中差可拟。」兄女曰：「未若柳絮因风起。
」公大笑乐。 以春天的柳絮比喻冬天的白雪.. 汝彼娘之大去老妪， 若非吾之留去操之在汝， 今日言吾之阖眼小憩，定当顶不少于两三句。
愤也，小憩者，非止吾也，何也点而言之？ 况乎余尚未失神，其冤枉也。 汝有何能？ 若真有能，何也伏于案上之学子者多于半者？ 厌汝者十者多有六，汝良乎？其数可见也。
前事不咎，今日之事则可恶也，而令吾所气愤。 母之，诚彼娘之非悦。
偷肉 某甲去京城卖肉，在路旁一厕所前停下来解手，把肉挂在外面。某乙见此，忙把肉偷 去。
还没来得及走远，甲已经走出厕所，抓住乙，问乙是否看见有人从厕所旁拿走了他的 肉。乙恐甲识破，早把肉衔在嘴里，不耐烦地说：“你真是个笨蛋！把肉挂在门外，哪能不 丢？如果像我这样，把肉衔在嘴里，岂有丢失之理？” ——魏·邯郸淳《笑林》 姓名游戏 北齐的西阳王徐之才极有口才，尤善于文字游戏。
在他未封王时，尝与尚书王元景戏 耍。王元景嘲笑徐之才的名字，说：“你的名字叫‘之才’，这又有什么讲法？依我看来， 叫‘乏才’还差不多。”
徐之才听了，不恼不怒，立即嘲弄王元景的姓：“‘王’这个字， 左边加上言为‘ㄍ摆俊保拷愠闪恕瘛由暇弊闶歉觥怼恚 出角、尾就变成‘羊’。”王元景听了，张口结舌，尴尬万分。
又有一次，徐之才宴请客人，卢元明也在座。席间，卢元明戏弄徐之才的姓说： “‘徐’字也就是未入人（“未”字加上“彳”和“入”）。”
徐之才当即嘲弄元明的姓— —“卢”（繁体为“卢”）字：“‘卢’这个字，安‘啊印稹悺 生男成‘虏’（虏）'，配‘马’（马）成‘驴’（驴）。”直说得卢元明面红耳赤，无言 以对，满座人笑得前仰后合。
——旧题隋·侯白《启颜录》 燕窝与牛犊 侯白后来做了唐朝的官员，经常跟人们在一块猜谜语，侯白先对众人约法三章：“所猜 之物，一、必须是能看见的实物；二、不能虚作解释，迷惑众人；三、如果解释完了，却见 不到此物，就应受罚。”接着他先出谜面：“背与屋一样大，肚与枕（车后横木）一样大， 口与杯子一样大。”
大家猜了半天，谁也没猜中，都说：“天下哪里有口和杯子一样大而背 却和屋一样大的物件？定无此物，你必须跟我们大家打个赌。”侯白跟众人打完赌，解释 说：“这是燕子窝。”
众人恍然大笑。 又有一次，侯白出席一个大型宴会。
席间，大家都让他作个谜语助兴。所猜之物，既不 能怪僻难识，又不能抽象不实。
侯白应声而道：“有物大如狗，面貌极似牛。这是何物？” 众人竞相猜个不停，有的说是獐子，有的说是鹿，但都被大家否定了。
便让侯白说出谜底。 侯白哈哈大笑道：“这是个牛犊。”
——旧题隋·侯白《启颜录》 贺知章乞名 唐玄宗天宝初年，文名颇著的秘书监贺知章，上书朝廷，欲告老致仕归故乡吴中。玄宗 李隆基，对他非常敬重，诸事待遇异于众人。
贺知章临行，与唐玄宗辞别，不由得老泪纵横。唐玄宗问他还有什么要求。
知章说： “臣知章有一犬子，尚未有定名，若陛下赐名，实老臣归乡之荣也。”玄宗说：“信乃道之 核心，孚者，信也。
卿之子宜名为孚。”知章拜谢受命。
时间长了，知章不觉大悟，自忖道：“皇上太取笑我啦。我是吴地人，‘孚’字乃是 ‘爪’字下面加上‘子’字。
他为我儿取名‘孚’，岂不是称我儿爪子吗？” ——宋·高怿《群居解颐》 不知诗为何物 艾子喜欢作诗。一天，艾子漫游到齐魏之间，下榻在一个旅馆。
夜间，他听到邻屋里有 人说话：“一首。”不一会儿又说：“又是一首。”
艾子莫名其妙，困意全无，一夜无眠。 躺到拂晓，共听到邻屋那人大约说了六七次，亦即六七首也。
艾子以为邻屋那人一定是个诗 人，在静静月夜里专心吟诗，心里油然产生敬意，又爱那人文思敏捷，便决定结识一下此人。 一大早，艾子就披衣下床，整好冠带，站在门口迎候。
不一会儿，邻屋里走出一个商贩 模样的人来，身材瘦弱，一脸病相。艾子感到很失望，心想：就凭这副尊容，哪像个诗人？ 也许，人不可貌相，不能盲目揣度。
便走上前拜问道：“听说先生诗篇甚多，能否让学生我 看一下。”那人说：“我是一个做生意的，从来不晓得诗是什么玩意儿。”
始终拒绝拿出诗 来。艾子固执地说：“昨天夜里听到您在屋里说‘一首’，不一会儿又说‘一首’，难道那 不是诗吗？” 那人听了，不觉哑然失笑：“您误会啦。
昨夜我肚子不好，每泻一次，夜里找不到手 纸，于是就用手揩。一夜腹泻不止，差不多污了六七次手。
我说的‘手’，不是诗篇之 ‘首’。”艾子听了，羞惭不已。
——旧题宋·苏轼《艾子杂说》 文字游戏 苏东坡听说王荆公的《字说》刚完成，前去荆公处祝贺，并戏言道：“大作中说：以 ‘竹’鞭‘马’为‘笃’。但我还有个疑问：“不知以‘竹’鞭‘犬’，又有什么可‘笑’ 的？”荆公笑而不答，却反问道：“‘鸠’字以‘九’从‘鸟’，难道也有什么证据吗？” 东坡立即作答：“《诗经》上说：‘尸鸠在桑，其子七兮’，加上它们的爹娘，恰好是 九个。”
星期五有幸听了小学语文教师责任编辑朱文君老师执教的“小古文教学”朱老师利用风趣幽默的教学语言，机智聪慧的教学风格将难懂的文言文变成有趣的课堂。
一趣，我们最喜欢听故事，朱老师在教文言文之前，创设一个情境，用风趣幽默的语言，绘声绘色地讲述了眼睛、鼻子、眉毛、嘴巴和耳朵争吵的故事，充分激发我们的学习兴趣。在教学时朱老师有意放慢教学节奏，先让我们自主理解意思，然后追问关键字词的解释，顺势揭示理解文言的基本方式，清晰易懂，印象深刻。
二趣，朱老师让我们讲讲、猜猜、读读、演演，不时地就某个情节诱发学生的猜想，再出示语句，让我们解读，充分吊起了我们的“胃口”。三趣，朱老师自身的范读很有趣，夸张的表情、动作显得诙谐幽默，让人捧腹大笑。
在朗读上，朱老师也别出心裁，以丰富多变的体态，反差极大的表情，抑扬顿挫的语调绘声绘色的把小古文演绎的淋漓尽致。四趣，朱老师多次就某个教学点与我们以文本中人物的角色当场对话，师生互动，充分演绎出各人物的特点，我们兴趣盎然，演得有情有趣，极富生活气息。
朱老师有意预设悬念，不直接揭示说话内容，而是让我们凭借自己的经验猜测主人会怎么说，训练我们根据说话人的性格来想像说话，这是一种高品质的语言训练艺术。一节课下来，我们学习兴趣浓厚。
枯燥的古诗文竟如此有趣。
蝜蝂传
蝜蝂者，善负小虫也。行遇物，辄持取，昂其首负之。背愈重，虽困剧不止也。其背甚涩，物积因不散，卒踬仆不能起。人或怜之，为去其负。苟能行，又持取如故。又好上高，极其力不已。至坠地死。
今世之嗜取者，遇货不避，以厚其室。不知为己累也，唯恐其不积。及其怠而踬也，黜弃之，迁徙之，亦以病矣。苟能起，又不艾，日思高其位，大其禄，而贪取滋甚，以近于危坠，观前之死亡不知戒。虽其形魁然大者也，其名人也，而智则小虫也。亦足哀夫！
译文
蝜蝂是一种喜爱背东西的小虫。爬行时遇到东西，总是抓取过来，抬起头背着这些东西。东西越背越重，即使非常劳累也不停止。它的背很不光滑，因而东西堆上去不会散落，终于被压倒爬不起来。有的人可怜它，替它去掉背上的东西。可是蝜蝂如果能爬行，又把东西像原先一样抓取过来背上。这种小虫又喜欢往高处爬，用尽了它的力气也不肯停下来，以致跌倒摔死在地上。
现今世上那些贪得无厌的人，见到钱财就捞一把，用来填满他们的家产，不知道财货已成为自己的负担，还只怕财富积聚得不够。等到一旦因疏忽大意而垮下来的时候，有的被罢官，有的被贬往边远地区，也算吃了苦头了。如果一旦被起用，他们又不思悔改，天天想着提高自己的地位，加大自己的俸禄，而且变本加厉地贪取钱财，以至接近摔死的程度，看到以前由于极力求官贪财而自取灭亡的人也不知接受教训。即使他们的外形看来庞大，他们的名字是人，可是见识却和蝜蝂一样，也太可悲了！
另外给你推荐《笑林广记》
摘录一点给你：
卷一 古艳部
卷二 腐流部
卷三 术业部
卷四 形体部
卷五 殊禀部
卷六 闺风部
卷七 世讳部
卷八 僧道部
卷九 贪吝部
卷十 贪窭部
卷十一 讥刺部
卷十二 谬误部
卷一 古艳部
升官
一官升职，谓其妻曰：“我的官职比前更大了。”妻曰：“官大，不知此物亦大不？”官曰：“自然。”及行事，妻怪其藐小如故，官曰：“大了许多，汝自不觉着。”妻曰：“如何不觉？”官曰：“难道老爷升了官职，奶奶还照旧不成？少不得我的大，你的也大了。”
比职
甲乙两同年初中。甲选馆职，乙授县令。甲一日乃骄语之曰：“吾位列清华，身依宸禁，与年兄做有司者，资格悬殊。他不具论，即选拜客用大字帖儿，身份体面，何啻天渊。”乙曰：“你帖上能用几字，岂如我告示中的字，不更大许多？晓谕通衢，百姓无不凛遵恪守，年兄却无用处。”甲曰：“然则金瓜黄盖，显赫炫耀，兄可有否？”乙曰：“弟牌棍清道，列满街衢，何止多兄数倍？”甲曰：“太史图章，名标上苑，年兄能无羡慕乎？”乙曰：“弟有朝廷印信，生杀之权，惟吾操纵，视年兄身居冷曹，图章私刻，谁来怕你？”甲不觉词遁，乃曰：“总之，翰林声价值千金。”乙笑曰：“吾坐堂时，百姓口称青天爷爷，岂仅千金而已耶？”
发利市
一官新到任，祭仪门毕，有未烬纸钱在地，官即取一锡锭藏好。门子禀曰：“老爷，这是纸钱，要他何用？”官曰：“我知道，且等我发个利市看。”
贪官
有农夫种茄不活，求计于老圃。老圃曰：“此不难，每茄树下埋钱一文即活。”问其何故，答曰：“有钱者生，无钱者死。”
獐与鹿》
一日，一老者指一獐一鹿问一小童曰“何者獐？何者鹿？”
小童实未见獐、鹿二者，良久，谓其曰“獐者边乃鹿，鹿者边乃獐。”
老者大奇。
《有尾者斩》
龙王于河阴下其令曰“今后，凡有尾者斩。”
一日，一鹿饮于其畔，闻泣声，顺之望去，见一蛤蟆泣于丛中。
问之“汝无尾，为何泣焉？”
蛤蟆谓之曰“我虽无尾，怎奈蝌蚪有尾。”
孔子东游，见两小儿辩斗，问其故。
一儿曰：“我以日始出时去人近，而日中时远也。”
一儿：“我以日初远，而日中时近也。”
一儿曰：“日初出大如车盖，及日中则如盘盂，此不为远者小而近者大乎？”
一儿曰：“日初出沧（cāng）沧凉凉，及其日中如探汤，此不为近者热而远者凉乎？”
孔子不能决也。
两小儿笑曰：“孰（shú）为汝（rǔ）多知乎？”
可参考
[原文]
鲁有执长竿入城门者，初坚执之，不可入；横执之，亦不可入。计无所出。俄有老父至，曰：“吾非圣人，但见事多矣！何不以锯中截而入？”遂依而截之。
译文：
鲁国有个人扛着根又粗又长的毛竹进城。到了城门口，他把毛竹竖起来拿，被城门卡住了，他把毛竹横着拿，又被两边的城墙卡住了。他折腾了半天，累得气喘吁吁，还是进不了城。旁边有个老头儿边看边乐：“你可真是个大草包！脑袋瓜里就只有一根弦！我这一大把年纪，过的桥比你走的路还多，你怎么不请教请教我呢？”卖毛竹的人连忙向他打躬作揖：“您老多指教吧！”老头儿捋（lǚ）着白胡子说：“这事儿简单。你把毛竹锯为两段，不就进去了吗？”“毛竹锯断了就不顶用了。”“那总比你卡在城外强吧！”卖毛竹的人就借了把锯子，把毛竹锯断，拿进城去了。
[提示]
如果说卖毛竹的人愚蠢可笑的话，那么，那个喜欢摆老资格、教训人的白胡子老头儿更加蠢笨。有些“老资格”总是喜欢按老经验、老规矩办事，他们不善于根据实际情况，灵活地考虑极简单的、甚至是一般常识范围内的问题，结果，出了很多馊主意。
1.俏皮qiào pí
例：《二十年目睹之怪现状》第十六回：「我道：‘这两句就俏皮得很？’继之道：‘俏皮么？我看轻薄罢了。’」
2.关风guān fēng
例：《京本通俗小说·冯玉梅团圆》：「话须通俗方传远，语必关风始动人。」
3.炙輠zhì guǒ
例：宋曾巩《送程公辟使江西》诗：「羽钗绝艳舞回雪，宝剑诸儒谈炙輠。」
4.机趣jī qù
例：明陈汝元《金莲记·构衅》：「太极图中生意好，鸢鱼机趣滔滔，渊源夙仰泰山高。」
5.诙谐huī xié
例：《汉书•东方朔传》：「其言专商鞅、韩非之语也，指意放荡，颇复诙谐。」
6.诽谐fěi xié
例：鲁迅《中国小说史略》第七篇：「﹝侯白﹞好为诽谐杂说，人多爱狎之。」
7.谐趣xié qù
例：明陈子龙《生日寄酬唐吴江杯斝之赠》诗：「贞心寡谐趣，慢迹谢崇营。」
(1) [knot the hair upon reaching adulthood in former time]∶ 束发 臣结发 游学 ,四十余年。—— 《史记·平津侯主父列传》 (2) [marry]∶指结为夫妻 而我在 万里 ,结发不相见。——江淹 《杂体·李都尉从军》 结发同枕席。—— 《玉台新咏·古诗为焦仲卿妻作》 详细解释 (1).束发。古代男子自成童 开始 束发，因以指初成年。 《史记·李 将军 列传》 ：“且臣结发而与 匈奴 战，今乃一得当单于，臣愿居前，先死单于。” 唐 陈子昂 《感遇诗》 之三四：“自言 幽 燕 客，结发事远游。” 宋 辛弃疾 《满江红》 词：“想 王郎 ，结发赋 从戎 ，传遗业。” 清 姚鼐 《连日清斋写佛经偶作数句》 诗：“结发慕胜因，而复役人事。” (2).成婚。古礼。成婚之夕，男左女右共髻束发，故称。 汉 苏武 《诗》 之三：“结发为夫妇，恩爱两不疑。” 唐 孟云卿 《古别离》 诗：“结发年已迟，征行去何早。” 清 陈梦雷 《青青河畔草》 诗：“结发与君知，相要以终老。” (3).指 妻子 。后亦指元配。 《隶释·汉国三老袁良碑》 ：“羣司以君父子，俱列三台， 夫人 结发，上为三老。” 《北史·后妃传下·齐冯翊太妃郑氏》 ：“妃是王结发妇，常以父母家财奉王。” 《京本通俗小说·冯 玉梅 团圆》 ：“ 冯公 又问：‘令孺人何姓？是结发还是再娶？’” 柳青 《创业史》 第一部第十一章：“他知道他哥是 婆娘 当家，自己做不得主。这 不是 他哥的结发妻子。”
词语分解
结的解释 结 （结） é 系（?），绾（僴 ）： 结网 。结绳。结扎。 条状物打成的 疙瘩 ：打结。蝴蝶结。 聚，合： 结晶 。结识。结盟。结交。结集。结合。结党营私。 收束，完了（僶 ）：结账。结局。结案。 结果 。结论。归 发的解释 发 （发） ā 交付，送出：分发。发放。发行（批发）。 放，射：发射。百发百中。焕发。 表达，阐述：发表。发凡（陈述某一学科或一本书的要旨）。阐发。 散开，分散：发散。 开展，张大，扩大：发展。发扬。
春日看梅花二首·侯夫人 其一 砌雪无消日，卷帘时自颦。 庭梅对我有怜意，先露枝头一点春。 其二 香清寒艳好，谁惜是天真。 玉梅谢后阳和至，散与群芳自在春。
侯夫人是隋炀帝时的宫女，姿容端好，才德兼备，但长期受不到恩宠，闭处深宫，自伤不遇，曾作《自感诗》三首，抒吐伤春之情。《春日看梅二首》，是她的抒怀之作。
第一首写梅花怜人之情。“砌雪无消日，卷帘时自颦。”那是一个雪后的晴天，外面寒意犹重。阶砌上的积雪还没有消融，她独自卷帘，颦眉不语，庭院中的梅花，已经吐艳了。此时此境，她那孤寂的心灵有谁来温慰呢？她深情地凝望着冷香寒艳的梅花，仿佛自己有了个知心的朋友。“庭梅对我有怜意，先露枝头一点春。”庭梅似乎也同情她，理解她的心境，特意在枝头先向她露一点春光。是怜惜她的遭境，还是和她有相同的命运呢？她在沉思着。
第二首写人的惜花之情。“清香寒艳好，谁惜是天真？”“寒艳”二字，唯梅花当得，可以说是梅花的代称了。梅花的高格，全在它那清香绝俗而自得天真。这“天真”一词，是她对梅花的高度评价。而唯天真之人，始能识得花之天真，所以这“天真”，又何尝不是女诗人的自评？然而梅花的天真，又有谁来怜惜呢？即我能惜之，又有谁能惜我？所以，“谁惜是天真”，是惜花，亦是自惜。一个“谁”字，道出无限深怨与哀伤。“玉梅谢后阳和至，散与群芳自在春。”梅花不与众芳争妍竞艳，它开在百花之先，可说标格天然，无一毫自矜和媚人之意。梅花谢了之后，随着姗姗而来的是一个风光明媚、“春日载阳”的季节，它虽然凋谢了，却把它的清香，它的幽艳散给群芳。诗至此，感情又由哀怨一变而为开朗。女诗人虽有自伤，胸襟却并不狭隘。她只觉得在那美好自在的春光中，梅花虽然不见了，却处处有梅花天真的身影，那又是多么令人喜悦啊！诗人此时，也仿佛成为梅花，是花是人？人即是花，花亦是人，诗人和玉梅，此刻是化而为一了。
《看梅》二首，感情真挚而浓烈，芳洁而温馨，诗人先写的是怜人的梅花，接着写怜惜梅花的人，末后则是人和花融为一体。作者正像一株亭亭玉立的梅花。梅花是天真的纯洁的，作者自身也是天真的纯洁的，梅花是清香的寒艳，作者是孤芳自赏的佳人，同是天真，可见花怜人人惜花，人是痴情，花也是真情。
此诗形式独特，本为七绝，而在首韵二句各减二字，使全诗结构成为五、五、七、七的形式，近于后来的词作，为长短句的先声。
目前主要从事计算机图形图像处理、模式识别等方面的研究工作,主要研究领域包括人工智能、软件开发技术等。主持完成项目：河南省科技攻关项目《谷物害虫实时监测与分类识别系统》，该项目获2007年河南省科技进步三等奖；河南省科技攻关项目《医用多媒体诊断系统》；河南省自然科学基金项目《人工神经网络应用于仓储物害虫的声音识别研究》；河南省科技攻关项目《基于内容的谷物害虫图像检索系统》(项目编号：0424220188)，该项目获2008年河南省信息产业厅科技进步一等奖；河南省基础与前沿技术研究项目《基于图像处理技术的面包烘焙品质检验方法研究》。另外还参与完成了国家 “十五”科技攻关项目两项。主持在研项目：河南省科技厅重点攻关项目《基于Bag of Words模型的昆虫分类识别系统》；郑州市科技局工业攻关项目（项目编号：0910SGYG23258-3 《基于图像处理技术的小麦粉加工精度自动检测系统》。近期发表的论文主要有：“基于支持向量机的仓储物害虫分类识别研究” 计算机工程与应用 2005第41卷；“基于数字图像处理技术的储粮害虫分类识别研究” 河南工业大学学报（自然科学版）2005 第26卷 第1期；“谷物害虫图像识别中数理统计特征的提取” 计算机应用与软件 2005年3月；“支持向量机在仓储物害虫分类识别中的应用” 微电子学与计算机 2005 1月；“面包烘焙品质检验中纹理特征的提取” 计算机工程与设计 2005年9月；主编和参编教材主要有：《数据结构教程》，西安电子科技大学出版社；《C语言程序设计》，科学出版社；《 Visual Basic 程序设计教程》机械工业出版社；《 AutCAD中文版建筑制图100例》电子工业出版社等六部。
主持项目：1、河南省高校青年骨干教师基金“室内无线定位中的TOA估计技术研究”2、河南省基础与前沿技术研究项目“MIMO系统信号处理算法研究”3、河南省教育厅自然科学基金项目“MIMO-OFDM系统信道估计与检测算法研究”发表主要论文杨铁军，靳婷.一种动态整周模糊值求解算法及仿真分析[J]. 系统工程与电子技术，2007，Vol.39,No.1, p 28-31。编写教材1. 梁义涛，傅洪亮，杨铁军等，现代DSP技术及应用，清华大学出版社，2012年3月。2. 管爱红，张红梅，杨铁军等，MATLAB基础及应用教程，电子工业出版社，2009年8月。
【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 Effect of dendritic cells transfected with total RNA of HepG2 cell line using GFP marker in vitro 【Abstract】 AIM: To investigate the feasibility of GFP as a marker to observe the dendritic cells (DCs) transfected with total RNA of tumor cells and the feasibility of the transfected DCs serving as a vaccine for potential immunotherapy. METHODS: Plasmid pGFPC3 was transfected into HepG2 stably. Total RNA was extracted from the HepG2GFP using Trizol; DCs were induced by liver cancer patients peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and transfected with the total RNA. The effect of transfection was observed by a fluorescence microscope, the changes of phenotype were detected by flow cytometry, and the change of IL12 secretion in the supernatant of DCs was detected by ELISA assay. The cytotoxic effect of CTLs was assessed by MTT assay. RESULTS: GFP was expressed stably in the HepG2GFP cells that presented green fluorescence under a fluorescence microscope, so did DCs transfected with total HepG2GFP cell RNA. After transfection, the expression of membrane molecules such as CD80 (13.2% to 86.7%), HLADR (38.9% to 97.9%), CD83 (0.9% to 97.1%), CD86 (31.2% to 92.5%) was increased dramatically, IL12 secretion in the supernatant was elevated significantly 〔(61.3±8.1) ng/L to (287.4±29.3) ng/L, P＜0.05〕. The CTLs activated by DCs transfected with total HepG2GFP RNA showed a potent specific lysis to HepG2 cells. CONCLUSION: GFP could be used as a marker to observe the effect of transfection of DCs with total tumor cell RNA. DCs transfected with total tumor cell RNA may serve as a promising vaccine of immunotherapy. 【Keywords】 dendritic cell；green fluorescent protein；RNA；transfection 【摘要】 目的：探讨GFP作为标记观察肝癌细胞RNA转染DCs效果的可行性及肿瘤细胞RNA转染DCs制备疫苗的可行性. 方法：绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2，Trizol法提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA；分离肝癌患者外周血单核细胞体外诱导DCs细胞，总RNA转染DCs，荧光显微镜下观察转染效果，流式细胞仪检测转染前后DCs表型变化；ELISA法检测转染前后上清中IL12变化情况；MTT法检测效应细胞对靶细胞的杀伤率. 结果：pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2后可得到稳定表达GFP的细胞HepG2GFP，荧光显微镜下呈绿色荧光；总RNA转染的DCs荧光显微镜下呈绿色荧光，CD80(13.2%上升至86.7%)，HLADR(38.9%上升至97.9%)，CD83(0.9%上升至97.1%)，CD86(31.2%上升至92.5%)表达明显升高，上清IL12分泌量ng/L显著增高(61.3±8.1→287.4±29.3，P＜0.05)；诱导的CTL能够对肝癌细胞株HepG2起特异性杀伤作用. 结论：GFP可以作为肿瘤细胞RNA转染树突状细胞的观察标记，肿瘤细胞RNA转染DCs可作为一种有效的肿瘤疫苗. 【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 【中图号】 R739.41 0引言 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是一种常见的恶性肿瘤，适合手术治疗的患者只占一少部分，具有较高的复发率，预后很差，严重威胁人类健康〔1〕. DCs(dendritic cells, DCs)是体内功能强大的专职性抗原提呈细胞，它能够高效的摄取、处理抗原，并将处理后的多肽呈递给静息型T细胞，引起针对该抗原的特异性免疫反应〔2〕. 国内外类似的研究中，都没有明确的可以观察肿瘤RNA转染DCs效果的指标，我们应用绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2，提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA转染DCs，观察转染后DCs绿色荧光蛋白表达及特异性表面标志及功能相关分子表达，检测其上清细胞因子分泌，探讨其作为肿瘤疫苗的可行性. 1材料和方法 1.1材料肝癌患者外周血单个核细胞来源于我科造血干细胞移植患者；HepG2肝癌细胞株由我科常规传代培养. 流式细胞仪（BD），DG3022A型酶联免疫检测仪（华东电子管厂），荧光显微镜Optiphot XIF（Nicon）等均为我院常备. FITCCD80，FITCHLADR，PECD83，PECD86抗体购自BD公司；rhGMCSF，rhIL4购自Peprorotec公司；TNFα购自我校生物技术中心；绿色荧光蛋白载体pGFPC3由陕西省肿瘤医院贾军博士惠赠；脂质体Transfection2000，Trizol Reagent购自Invitrogen；RPMI 1640培养基、胎牛血清、G418购自Gibco公司，Xvivo无血清培养基购自BioWhittaker；IL12 ELISA检测试剂盒购自Bioscience公司；MTT购自Sigma公司. 1.2方法参照Transfection2000说明书，pGFPC3转染HepG2，G418筛选2 mon. 筛选细胞命名HepG2GFP，荧光显微镜下观察. Trizol试剂提取HepG2GFP总RNA，紫外灯下观察，-80℃冻存备用. 同样方法提取HepG2总RNA. 取肝癌患者造血干细胞分离液，贴壁法分离单核细胞，贴壁细胞在细胞因子rhGMCSF，rhIL4作用下，诱导DCs. 倒置显微镜、电子显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表型. 1.2.1转染树突状细胞收集培养4 d的DCs，转入6孔板，转染HepG2GFP总RNA. 另设转染HepG2总RNA及空白对照组. 继续培养48 h. 荧光显微镜下观察. 1.2.2细胞因子分泌的测定48 h后，收集各组DCs上清，ELISA法检测转染前后各组细胞上清中IL12分泌量. 1.2.3CTL效应收集各组DCs，30 Gy 60Co照射后与复苏冻存的非贴壁细胞按20∶1比例混合接种于24孔板，培养5 d，收集的细胞即为效应细胞. 收集对数生长期的HepG2细胞作为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按20∶1比例混合接种于96孔板. 同时设单一靶细胞组、单一效应细胞组. 培养24 h后，MTT法检测.以下述公式计算杀伤效率.CTL杀伤效率=〔1-（效靶A490-效应细胞A490）/靶细胞A490〕×100%.统计学方法：结果采用SPSS 10.0统计软件分析.2结果 2.1HepG2GFP总RNA转染DCs稳定转染及筛选后得到的HepG2GFP细胞，能够稳定的表达GFP，荧光显微镜下所有细胞都呈现绿色荧光（图1），传代20次以上仍无消失. 与对照细胞相比，GFP基因修饰细胞在形态、生长等特性上均无显著改变，也未见GFP表达对靶细胞的毒性. 使用Trizol提取HepG2GFP细胞总RNA后，取2 μL总RNA进行凝胶电泳，可见5 s，18 s和28 s条带（图2）. 单个核细胞贴壁后，贴壁细胞在细胞因子GMCSF，IL4的作用下，培养第2日出现细胞集落，但细胞集落较小. 5 d后，集落明显增加、变大，出现具有毛刺状突起的细胞. 至7 d，集落开始减少，产生大量具有树枝状突起的细胞（图3A，B）. 荧光显微镜下，HepG2GFP总RNA转染DCs组细胞呈绿色荧光，而HepG2总RNA转染组及空白对照组则无明显荧光表达（图4A，B，C）. 图1荧光显微镜下pGFPC3稳定转染后HepG2胞浆荧光阳性 ×250（略） 图2HepG2GFP细胞的总RNA电泳（略） 图3树突状细胞形态(第7日)（略） 2.2流式细胞仪检测细胞表型诱导d 7，DCs表达CD80 13.2%，HLADR 38.9%，CD86 31.2%，CD83低表达，仅0.9%；转染后上述分子表达明显升高，分别为CD80 86.7%，HLADR 97.9%，CD86 92.5%，CD83 97.1%，提示转染后细胞具有成熟DCs特征. 图4总RNA转染DCs×250（略） 2.3ELISA检测IL12分泌HepG2GFP总RNA转染DCs组上清中IL12分泌明显增加，显著高于转染前〔（287.4±29.3) ng/L vs (61.3±8.1) ng/L； n=6，P＜0.05〕. 2.4CTL介导细胞毒效应HepG2GFP总RNA转染DCs刺激的CTL对HepG2细胞杀伤率为（62.6±2.9）%，未转染的DCs刺激的T细胞对HepG2的杀伤作用为(20.8±1.5)%，无DCs刺激T细胞对HepG2的杀伤作用为(20.8±1.5)%，总RNA转染DCs刺激的CTL对HepG2细胞杀伤率明显高于两个对照组（n=6，P＜0.05）. HepG2GFP总RNA转染DCs刺激的CTL对SMMC7721和K562细胞杀伤率分别为(37.7±1.8)%和(26.8±1.1)%，对HepG2细胞杀伤率明显高于SMMC7721和K562细胞（n=6，P＜0.05）. 3讨论 DCs是体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞，它在T细胞免疫中发挥着极其重要的作用〔2〕. 应用各种肿瘤抗原致敏DCs制备疫苗是近年来研究的热点 〔3-8〕. 肿瘤细胞总RNA转染DCs制备疫苗与其他方法相比，具有如下优越性：首先，它不受已知肿瘤抗原的限制，可诱导出多克隆的CTL；其次，转染所需的RNA可以通过扩增方法得到，很少量的肿瘤组织样本即可扩增得到大量的RNA〔8〕. 但目前国内外的研究中，尚未有可以明确观察总RNA转染DCs效率的方法. 我们应用稳定表达GFP的HepG2GFP总RNA转染DCs，以GFP为标记观察总RNA转染DCs的效率，探讨其作为肿瘤疫苗的可行性，为肝癌临床治疗提供实验基础. 本试验中，HepG2GFP总RNA转染后的DCs在荧光显微镜下观察，胞质呈现绿色荧光，证实GFP mRNA可以在DCs胞质内正常表达，同时说明肿瘤细胞总RNA同样也可以在DCs胞浆内进行翻译表达. 转染后CD83，CD80，CD86，HLADR表达明显升高，IL12分泌明显增加，说明RNA转染，促进了DCs的体外成熟. 成熟DCs主要通过MHCI类途径，将肿瘤细胞总RNA在DCs胞质内进行翻译表达的肿瘤抗原呈递给T淋巴细胞. 此途径诱导的T淋巴细胞主要为CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）. 本试验中，诱导的CTL对HepG2的细胞毒效应明显高于对照组T细胞，证实诱导的T淋巴细胞为肿瘤特异性的. 因此，在当前仍未发现肝癌特异性抗原情况下，应用肝癌细胞总RNA转染DCs制备瘤苗，诱导针对肝癌细胞的多克隆CTL，可以作为肝癌DCs疫苗的一个发展方向. 【参考文献】 〔1〕 Qin LX, Tang ZY. The prognostic molecular markers in hepatocellular carcinoma 〔J〕. World J Gastroenterol, 2002, 8(3):385-392. 〔2〕 张红梅,任军,张利旺,等. 外周血造血干细胞体外定向诱导树突状细胞及功能鉴定〔J〕. 第四军医大学学报,2003, 24(1):83-85. 〔3〕 Kaplan JM, Yu Q, Piraino ST, et al. Induction of antitumor immunity with dendritic cells transducted with adenovirus vector encoding endogenous tumorassociated antigens 〔J〕. J Immunol,1999, 163(2): 699. 〔4〕 Schnurr M, Galambos P, Scholz C, et al. Tumor cell lysatepulsed human dendritic cells induce a Tcell response against pancreatic carcinoma cells: An in vitro model for the assessment of tumor vaccines 〔J〕. Cancer Res, 2001, 61(17):6445-6450. 〔5〕 Barbuto JA, Ensina LF, Neves AR, et al. Dendritic celltumor cell hybrid vaccination for metastatic cancer 〔J〕. Cancer Immunol Immunother, 2004, 53: 1111-1118. 〔6〕 Heiser A, Maurice MA, Yancey DR, et al. Induction of polyclonal prostate cancerspecific CTL using dendritic cells transfected with amplified tumor RNA 〔J〕. J Immunol, 2001, 166: 2953-2960. 〔7〕 Heiser A, Coleman D, Dannull J, et al. Autologous dendritic cells transfected with prostatespecific antigen RNA stimulate CTL responses against metastatic prostate tumors 〔J〕. J Clin Invest, 2002, 109(3):409-417. 〔8〕 Kalady MF, Onaitis MW, Emani S, et al. Dendritic cells pulsed with pancreatic cancer total tumor RNA generate specific antipancreatic cancer T cells 〔J〕. J Gastrointest Surg, 2004, 8(2):175-181.
这个医生水平很好。根据今日头条资料，潘红斌是主任中医师，1995年毕业于浙江中医学院中医系，从事内科临床工作10余年，2002年起师从国家级名中医胡斌，并成为省级名中医学术继承人，在省级杂志发表专业论文8篇，潘红斌医生不但医术精湛而闻名遐迩，而且医德高尚，非常和蔼慈祥，对病人的态度就像对待亲人般关心。擅长中西医结合治疗呼吸系统、消化系统、血液系统等多种恶性肿瘤性疾病，针对肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤等多种恶性肿瘤的术后调理、防止术后转移、复发、减轻放、化疗的毒副反应有显著疗效。
1
SVDFeature主页：SVDFeature-SVDFeature语言：C一个feature-based协同过滤和排序工具，由上海交大Apex实验室开发，代码质量较高
在KDDCup2012中获得第一名，KDDCup2011中获得第三名，相关论文发表在2012的JMLR中，这足以说明它的高大上
SVDFeature包含一个很灵活的Matrix推荐框架，能方便的实现SVD、SVD等方法,是单模型推荐算法中精度最高的一种
SVDFeature代码精炼，可以用相对较少的内存实现较大规模的单机版矩阵分解运算
另外含有Logisticregression的model，可以很方便的用来进行ensemble
主要致力于液压系统设计及系统动力学、渔船渔机设计理论与方法方面的研究，曾参加国家自然科学基金项目1项、浙江省重大和重点科技攻关项目各1项，主持浙江省科技厅项目1项、厅局级项目2项、校级项目2项，在《应用力学学报》、《船舶力学》等刊物上发表论文近20篇，其中EI收录4篇，获省科技厅优秀论文二等奖1次，主编《液压气压传动与控制》校级重点教材、参编《液压与气压传动》等教材。入选舟山市“111人才工程”培养对象，是机械设计与理论校级重点学科学科负责人和渔船渔机设计理论与方法学术带头人，浙江船舶工程学会会员。